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研究背景和目的： 社区获得性肺炎（Community acquired pneumonia，CAP）是常见的感染性疾病，一般 CAP患者经数天的抗感染治疗即可基本痊愈，然而也有部分患者病情迅速发展，最后因出现急性肺损伤或感染性休克而死亡。肺炎患者病情差异的原因众多，基因背景是重要的影响因素之一，不同的基因背景可能影响个体感染病原菌后的炎症反应强度。炎症反应是机体清除病原微生物或非己成份的防御反应，但过度的炎症反应可损伤机体正常组织细胞，引起器官功能不全。CAP诱发急性肺损伤的本质是肺局部过度激活的炎症反应损伤肺实质与间质，肺换气功能受损继而出现难以纠正的低氧血症。炎症通路分子的过度活化与炎症介质的不恰当释放是炎症反应过度激活的原因。炎症反应通路关键分子与炎症介质基因多态性，可能从遗传的层面上决定了不同个体对感染诱发炎症反应强度的差异性，最终影响疾病的严重程度及预后。 基因的多态性现象是在遗传层面上影响基因表达的因素。基因多态性是指在一个生物群体中，同时和经常存在两种或多种不连续的基因型或等位基因，对于个体而言，等位基因的碱基序列终生不变，并按孟德尔规律世代相传。基因多态性不仅影响遗传性疾病的发病率，还可能干预机体对感染性疾病的易感性和预后，而且基因多态性是基因的固有特征，不受机体的生理状态与寿命影响。因此对CAP患者稳定的基因多态性进行检测可以对CAP严重程度及预后进行判断，并以此作为制订和调整治疗方案的依据。 活化炎症反应的信号分子众多，肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor alpha，TNF-α)、肿瘤坏死因子受体（Tumor Necrosis Factor Receptor，TNFR）及核因子kappa B（Nuclear factor kappa B，NF-κB）是炎症反应激活和放大过程的关键分子，在感染所引发的炎症反应中起重要作用。机体在致炎因素的作用下通过炎症反应通路引起初次的TNF-α释放，此释放后的TNF-α与炎症细胞表面的TNFR结合，向下激活NF-κB，由NF-κB调节其他炎症介质的表达，如IL-6、IL-1β等，提高了炎症反应强度；NF-κB也促进TNF-α的释放，此部分TNF-α再次与TNFR结合，再次活化炎症反应通路，产生级联放大作用，形成正反馈放大炎症反应。NF-κB是调节炎症介质表达的重要转录因子，其非编码区内若干核苷酸的插入或缺失影响NF-κB对炎症反应的调节活性。TNF-α与 TNFR结合能放大炎症反应和介导细胞死亡，二者的基因启动子存在的多态性位点可能影响二者的表达量，从而影响炎症反应强度。 鉴于TNF-α、TNFR及NF-κB在重症肺炎的发生发展过程中起着重要的作用，且国内外尚少见TNF-α、TNFR及NF-κB基因多态性与 CAP易感性及严重程度相关性的报道，通过研究 TNF-α、TNFR及NF-κB基因多态性，预测机体对CAP易感性、严重程度及预后有重大意义。 本实验采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）、采用聚合酶链反应-高分辨率熔解曲线法(polymerase chain reaction-high resolution melting curve，PCR-HRM)及基因测序技术检测中国广东汉族人群社区获得性肺炎患者及健康人群的TNF-α、TNFR及NF-κB基因多态性分布情况，分析其基因多态性与肺炎易感性、严重程度的相关性，为以期通过炎症反应通路关键分子的基因多态性分析进行 CAP易感性、严重程度及预后预测，指导临床治疗。 材料与方法： 1、研究对象 CAP组为2010年10月-2011年6月就诊于广州军区广州总医院的肺炎患者66例，其中男性37例，女性29例，年龄18-83岁，平均年龄（60.59±14.67）岁；对照组为广州军区广州总医院的健康体检人群66例，其中男性31例，女性35例，年龄21-83岁，平均年龄(54.62±15.45)岁。两组人群均为无血缘关系的广东地区汉族人，且在性别、年龄上分布没有差异。根据2007年 IDSA/ATS关于成人 CAP的诊治指南，将 CAP患者分为重症肺炎组(severe community-acquired pneumonia,SCAP）和非重症肺炎组（non-SCAP,NSCAP），根据 CURB-65和PSI评分量化肺炎严重程度。根据患者28天内是否存活，分为死亡组和存活组。 2、基因组DNA提取及定量各研究对象抽取1mLEDTA抗凝的外周静脉血，使用基因组DNA提取试剂盒提取DNA，通过Nanodrop2000对提取的基因组DNA进行浓度和纯度分析。根据测定结果将样本DNA稀释至30ng/μL的工作液。 3、对基因组DNA进行PCR扩增，采用PCR-RFLP、PCR-HRM及基因测序检测 TNF-α、TNFR及 NF-κB的基因多态性，并抽样测序验证多态性结果准确性。TNF-α-308G/A、TNFR1-609G/T、TNFR1+36A/G、TNFR2+676T/G的基因多态性使用PCR-RFLP进行检测； TNFR2+1663A/G、+1668 T/G、+1690 C/T使用测序法进行检测。NFκB1-94ins/del ATTG采用PCR-HRM进行检测。 4、统计分析：应用SPSS13.0软件进行统计学分析。计数资料的组间比较采用χ2检验，如理论频数<5，采用Fisher确切概率法。计量资料以均数±标准差(x±s)表示，非正态资料以中位数及四分位数间距表示。计量资料组间比较采用两独立样本t检验。显著性水平α取0.05。 结果： 1、TNF-α、TNFR及NF-κB基因多态性分布情况 在CAP组和对照组均未发现携带TNFR1+36GG、TNFR2+1668GG基因型的人群。TNF-α-308G/A、TNFR1+36A/G、TNFR2+676T/G、TNFR2+1663A/G、+1668 T/G、+1690C/T及NFκB1-94ins/delATTG的基因型及等位基因在CAP组和对照组之间的分布差异无统计学意义（P>0.05），TNFR1-609G/T基因型在CAP组和Control组之间的分布差异无统计学意义（P>0.05）；其等位基因分布在两组间差异有统计学意义（P=0.036）。 2、TNF-α、TNFR及NF-κB基因多态性与肺炎严重程度的相关性 TNF-α-308G/A、TNFR1+36A/G、TNFR2+676T/G及 NFκB1-94ins/delATTG的基因型及等位基因在SCAP组和NSCAP组之间分布差异无统计学意义（P>0.05），TNFR1-609G/T、TNFR2+1690C/T的基因型在SCAP组和NSCAP组之间分布差异无统计学意义（P>0.05），TNFR1-609G/T、TNFR2+1690C/T的等位基因在SCAP组和NSCAP组之间分布差异有统计学意义（P=0.027）。 TNF-α-308G/A、TNFR1-609G/T、TNFR1+36A/G、TNFR2+676T/G、TNFR2+1663 A/G、+1668 T/G、+1690C/T及NFκB1-94ins/delATTG多态性在死亡组和存活组之间分布差异无统计学意义（P>0.05）。 根据TNF-α-308G/A、TNFR1-609G/T、TNFR1+36A/G、TNFR2+676T/G、TNFR2+1663A/G、+1668 T/G、+1690C/T及NFκB1-94ins/delATTG的多态性分类，肺炎患者各组间的住院时间、白细胞数、中性粒细胞数、血沉、C-反应蛋白差异无统计学意义（P>0.05）。 根据 TNF-α-308G/A、TNFR1+36A/G、TNFR1-609G/T、TNFR2+676T/G、TNFR2+1663A/G、+1668 T/G、+1690C/T及NFκB1-94ins/delATTG的多态性分类，肺炎患者各组间的CURB-65、PSI评分差异无统计学意义（P>0.05）。 结论： 1. TNFR2+1668G等位基因在中国广东汉族人群中的分布稀少。 2. TNF-α-308G/A、TNFR1+36A/G、TNFR2+1663A/G、+1668 T/G及 NFκB1-94ins/delATTG多态性与CAP易感性及严重程度无相关性。 3.携带 TNFR1-609T等位基因患者肺炎发病率高，病情相对较重，携带TNFR2+1690C等位基因肺炎患者病情相对较重，但两者与预后不相关。