胶原、HSP47、MMP-2以及TIMP-1在TAO患者眶周组织中的表达特点

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目的:通过观察胶原(I、III、V型)、热休克蛋白47(HSP47)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)以及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)在甲状腺相关性眼病(TAO)患者球后脂肪与眼外肌组织中的表达特点探索其在TAO患者眶周组织纤维化过程中的意义。方法:于2019.5-2019.9月期间收集明确诊断为静止期TAO患者(共8例)的球后脂肪组织4例以及眼外肌组织4例(TAO组),同期收集因眼外伤或眼球萎缩到我院行眼球摘除术患者的球后脂肪组织4例(对照组)与因斜视到我院行斜视矫正手术患者的眼外肌4例(对照组)。TAO组和对照组患者均无活动性炎症。通过HE染色、Masson染色实验对组织行病理检测,分析样本中胶原表达及纤维化程度的差异;通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测组织中的胶原(I、III、V型)、MMP-2、TIMP-1以及HSP47的m RNA相对表达水平;通过蛋白质免疫印迹实验(Western Blot,WB)检测胶原(I、III、V型)、HSP47、MMP-2以及TIMP-1蛋白表达情况;使用SPSS17.0对Western-Blot以及q RT-PCR的数据进行正态性检验,均呈正态分布,分别进行独立样本T检验并使用Graphpad Prism8.0绘制统计图。结果:1.TAO患者眼眶影像学检查的特点:与对照组相比,TAO患者双眼眼球明显突出,球后脂肪容量明显增加,间隙不清,与周围组织边界模糊。2.TAO患者球后脂肪与眼外肌组织内HE染色实验结果的特点(1)在球后脂肪组织中:TAO组患者组织结构较对照组欠完整;脂肪细胞明显增多,大小不一且形态不清晰,部分细胞明显水肿。(2)在眼外肌组织中:对照组眼外肌组织正常结构完全消失,形态模糊;肌细胞少见,排列紊乱无规则;TAO组正常结构尚存在,形态较清晰,肌纤维数量明显高于对照组,分布较为集中,排列较为规律,横截面积大小不一。3.TAO患者球后脂肪与眼外肌组织内Masson染色实验结果的特点:(1)在球后脂肪组织中:Masson染色显示TAO组胶原纤维表达明显高于对照组,且纤维弥漫性分布,排列较对照组紊乱无规律。(2)在眼外肌组织中:对照组中肌纤维明显少于TAO组,而胶原纤维表达则明显高于TAO组,呈弥漫性分布,排列紊乱无规律。4.胶原、HSP47、MMP-2及TIMP-1在TAO患者球后脂肪与眼外肌组织中m RNA相对表达水平的特点:q RT-PCR结果示与对照组相比,TAO组胶原Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ,MMP-2、TIMP-1以及HSP47的m RNA相对表达水平均无差异;5.胶原、HSP47、MMP-2和TIMP-1在TAO患者球后脂肪与眼外肌组织中蛋白表达的特点:(1)在球后脂肪组织中:与对照组相比,TAO组胶原Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、HSP47、MMP-2以及TIMP-1的蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义;(2)在眼外肌组织中:与TAO组相比,对照组中胶原Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、HSP47、MMP-2以及TIMP-1的蛋白表达水平高于TAO组,差异有统计学意义;结论:1.TAO患者球后脂肪组织中I、Ⅲ、V型胶原,MMP-2、TIMP-1以及HSP47的表达高于眼外伤或眼球萎缩患者,纤维化程度也更高。2.斜视患者眼外肌组织中I、Ⅲ、V型胶原,MMP-2、TIMP-1以及HSP47的表达高于TAO患者,纤维化程度也更高。3..HSP47在TAO患者眼外肌中表达,但其与眼外肌的纤维化的关系尚需要通过选择更佳的对照组行进一步研究进行验证。
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