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茁霉多糖(Pullulan)是由出芽短梗霉(Aureobasidium Pullulans)在发酵过程中产生的一种胞外多糖,具有易溶于水、不凝胶化、不老化、可任意加工成型和无任何毒性等优良特点,可以被广泛应用于医药制造、食品包装、水果和海产品保鲜、化妆品工业、烟草制造业和农业种子保护及工业废水处理等众多领域。本文以马铃薯为原料,首先经中温α-淀粉酶液化,采用二次通用旋转组合试验的方法对不同的糖化工艺(SNase303糖化酶和β-淀粉酶)和处理方法(脱色脱盐和未脱色未脱盐)进行研究,制备出不同DE值的马铃薯水解液并以其作为诱变菌株出芽短梗霉D1-11发酵的碳源;同时以多糖产量、生物量、色素产量等为测定指标,采用正交试验、均匀设计等方法,研究了不同培养条件(装液量、pH、接种量、温度)和不同营养条件(碳源、二价阳离子)对茁霉多糖发酵的影响,得到如下结果:1.经单因素试验和正交试验确定了D1-11的最适培养条件,最优培养条件为装液量25%,初始pH6.5,温度30℃,接种量8%,其中装液量对多糖产量的影响最大,pH和接种量对多糖产量的影响也比较大,只有温度的影响比较小,按此条件培养的茁霉多糖产量为19.71g/L。2.中温α-淀粉酶液化马铃薯粉浆的工艺条件为:粉浆浓度25%,中温α-淀粉酶酶用量10u/g,液化时间50min。3.单因素试验确定了符合二次回归通用旋转组合试验的糖化工艺参数,采用多元回归分析法得到二阶多项式回归方程式,其相关系数为0.9831,并且模型在a=0.05的水平上回归显著。响应面分析表明:在60℃,pH3.8-4.5下,改变β-淀粉酶酶用量(30-90u/g),酶解时间(3-5h)和液化液DE值(15%-19%),可以制备出20-60%之间任意DE值的淀粉糖浆,用于茁霉多糖发酵的碳源。影响糖化液DE值由大到小的因素为酶解时间>β-淀粉酶用量>液化液DE值。4.通过单因素试验和二次回归通用旋转组合试验确定SNase303糖化酶糖化工艺参数,采用多元回归分析法得到二阶多项式回归方程式,其相关系数为0.9823,并且模型在a=0.05的水平上回归显著。响应面分析表明:在60℃,pH3.8-4.5下,改变液化液DE值(15-19%),SNase303糖化酶酶用量(150-250u/g),液化时间(3-5h),可以制备出20-60%之间任意DE值的淀粉糖浆,用于茁霉多糖发酵的碳源。影响糖化液DE值由大到小的因素为酶解时间>液化液DE值>SNase303糖化酶用量。5.经单因素试验分别对碳源和二价阳离子进行考察,结果表明经β-淀粉酶制备的水解液较经SNase303糖化酶制备的水解液更适合做茁霉多糖的发酵碳源,且脱盐脱色处理会提高多糖的产率,DE值50%的β-淀粉酶糖化液经脱色脱盐处理,在80g/L时多糖产量最高为21.98g/L,CaCO3在0.1g/L时多糖产量最高为21.11g/L。6.通过均匀试验确定摇瓶培养最佳发酵工艺为CaCO3 0.06g/L,碳源82.25g/L,装液量26.62%,接种量11.99%,pH 7.5,根据本工艺茁霉多糖产量可达最大产量28.90g/L;经变量分析可知碳源对多糖产量的影响最大。