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目的:建立大鼠棘阿米巴角膜炎动物模型,研究抗阿米巴药物联合多西环素对棘阿米巴角膜炎中基质金属蛋白酶-8(MMP-8)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法:1.将60只健康SD大鼠随机分为3组,每组20只。空白对照组不予任何处理;条件对照组刮除大鼠右眼角膜中央上皮层,取制备好的无菌接触镜覆盖术眼角膜,将PBS液注入镜片与角膜层间;实验组刮除大鼠右眼角膜中央上皮层,取黏附有棘阿米巴的接触镜覆盖术眼角膜,并将棘阿米巴悬液注入镜片与角膜层间,无菌睑裂缝合24小时后拆线并移除接触镜,分别于术后第1、3、5、7、10天各时间点,角膜刮片镜检、棘阿米巴原虫培养及取材行病理切片检查。2.将64只健康SD大鼠随机分为4组,每组16只。刮除大鼠右眼角膜中央上皮层,手术对照组取制备好的无菌接触镜覆盖术眼角膜,将PBS液注入镜片与角膜层间;模型组、洗必泰组和治疗组取黏附有棘阿米巴的接触镜覆盖术眼角膜,并将棘阿米巴悬液注入镜片与角膜层间,无菌睑裂缝合24小时后拆线并移除接触镜。洗必泰组予0.02%醋酸洗必泰点眼,治疗组予0.02%醋酸洗必泰联合0.02%多西环素眼液点眼,手术对照组、模型组大鼠均予以眼液溶媒点眼。分别于术后第3、5、7、10天,裂隙灯下观察大鼠角膜溃疡的情况,计算炎症指数;角膜取材行病理切片检查及炎症细胞计数;荧光定量PCR法检测角膜组织中MMP-8及MCP-1的表达。结果:1.经角膜病灶处刮片镜检、培养及病理切片检查证实了实验组大鼠右眼均感染上棘阿米巴角膜炎;角膜病理切片HE染色显示,感染眼第1天即出现炎症细胞的浸润,于第3天、5天呈上升趋势,随时间的推移,第7天、10天逐渐下降。2.大鼠棘阿米巴角膜炎模型建立后,模型组第3天炎症指数为2.33±0.27,第5天为2.92±0.17,第7天为2.75±0.17,第10天为2.33±0.27;洗必泰组第3天炎症指数为1.92±0.17,第5天为2.59±0.17,第7天为2.50±0.20,第10天为2.17±0.19;治疗组第3天炎症指数为1.42±0.17,第5天为2.25±0.17,第7天为2.08±0.17,第10天为1.84±0.19;术后第3天、5天、7天时,治疗组与洗必泰组的炎症指数相比显著降低(均为P<0.05),差异有统计学意义。模型组术后第3天炎症细胞计数为158.00±6.60;第5天为177.75±6.85,第7天为139.50±8.96,第10天为42.00±4.97;洗必泰组术后第3天炎症细胞计数为138.25±7.97;第5天为151.25±5.80,第7天为108.25±11.09,第10天为39.50±3.42;治疗组术后第3天炎症细胞计数为120.25±6.55;第5天为127.75±7.63,第7天为86.25±5.38,第10天为29.50±8.96;术后第3天、5天、7天时,治疗组炎症细胞计数少于洗必泰组(均为P<0.05),差异有统计学意义。荧光定量PCR法检测模型组术后第3天MMP-8基因m RNA的相对表达量为2.10±0.31,第5天为3.39±0.34,第7天为1.76±0.44,第10天为0.43±0.10;洗必泰组术后第3天MMP-8基因m RNA的相对表达量为1.03±0.29;第5天为2.35±0.49,第7天为1.49±0.34,第10天为0.21±0.04;治疗组术后第3天MMP-8基因m RNA的相对表达量为0.29±0.16;第5天为0.83±0.23,第7天为0.79±0.16,第10天为0.19±0.03;术后第3天、5天、7天时,治疗组MMP-8基因与洗必泰组相比表达量显著下降(均为P<0.05),差异有统计学意义,第10天与洗必泰组比较MMP-8的m RNA相对表达量无明显下降趋势(P>0.05)。荧光定量PCR法检测模型组术后第3天MCP-1基因m RNA的相对表达量为1.43±0.37,第5天为1.87±0.09,第7天为0.48±0.05,第10天为0.22±0.01;洗必泰组术后第3天MCP-1基因m RNA的相对表达量为1.02±0.20;第5天为1.29±0.37,第7天为0.26±0.05,第10天为0.06±0.01;治疗组术后第3天MCP-1基因m RNA的相对表达量为0.35±0.07;第5天为0.29±0.12,第7天为 0.11±0.05,第10天为0.05±0.02;术后第3天、5天、7天时,治疗组MCP-1基因与洗必泰组相比表达量显著下降(均为P<0.05),差异有统计学意义,第10天与洗必泰组比较MCP-1的m RNA相对表达量无明显下降趋势(P>0.05)。结论:1.在上皮缺损的角膜上覆盖黏附有棘阿米巴的角膜接触镜,并滴加阿米巴悬液的方法,可以成功建立稳定的大鼠棘阿米巴角膜炎动物模型。2.抗阿米巴药物治疗的同时局部应用多西环素,可以抑制大鼠棘阿米巴角膜炎的炎症细胞浸润,降低MMP-8及MCP-1的表达,起到减轻炎症损害的作用。