目的：预先给予短暂、轻微、不至于引起神经元损伤的脑缺血预处理，可以减少缺血.再灌注损伤，产生脑缺血耐受。脑缺血预处理诱导脑缺血耐受，已被大量的研究所证实，但其发生机制至今尚未阐明。NF-κB是从B淋巴细胞核中检测到的一种能与免疫球蛋κ轻链基因的增强子κB序列特异结合的核蛋白因子。非活化状态NF-κB以IκB聚合的三聚体形式或与前体蛋白聚合的二聚体形式存在于胞浆中，在缺血缺氧等刺激作用下，通过多种信号途径IκB发生磷酸化并与NF-κB解聚，NF-κB被激活，将信息从胞浆传至胞核并启动相关靶基因的转录。此外，有的研究发现，还有一些独立于IκB的信号，如p38 MAPK可以对NF-κB进行磷酸化修饰，调节其活性，使其更有效地促进基因转录[12]。我室既往研究发现，脑缺血预处理通过p38 MAPK通路上调星形胶质细胞谷氨酸转运体-1(glialglutamate transporter-1，GLT-1)大量表达而诱导脑缺血耐受；NF-κB的特异性抑制剂BAY11-7082剂量依赖性阻断脑缺血预处理所诱导的脑缺血耐受。但脑缺血预处理是否通过p38 MAPK信号转导途径影响NF-κB信号通路而引起GLT-1的大量表达，尚有待阐明。为此，本实验旨在观察NF-κB在脑缺血预处理激活p38 MAPK上调GLT-1表达诱导脑缺血耐受中是否发挥作用。　　方法：健康雄性Wistar大鼠(280～320g)198只，首先永久凝闭椎动脉，恢复2天后，随机分为以下三部分：　　1脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中NF-κB p50、NF-κB p50/p65二聚体复合物、NF-κB DNA结合活性的变化　　具体分组如下：①sham组(n=27)：只暴露双侧颈总动脉，不阻断血流；②脑缺血预处理(cerebral ischemic preconditioning，CIP)组(n=27)：夹闭双侧颈总动脉3 min，然后恢复血流再灌注；③损伤性缺血(ischemicinsult，Ⅱ)组(n=27)：夹闭双侧颈总动脉8 min，然后恢复血流再灌注；④CIP+Ⅱ组(n=27)：夹闭双侧颈总动脉3 min作为脑缺血预处理，再灌注2天后，夹闭双侧颈总动脉8 min作为损伤性缺血，然后恢复再灌注。各组均分为9个时间点，即假手术或末次缺血后0 min、15 min、30 min、3h、6 h、1 d、2 d、4 d、7 d(每个时间点n=3)。　　在规定的时间点，断头取海马脑组织，应用western blot方法来观察NF-κB p50蛋白表达的变化，免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)方法来观察NF-κB p50/p65二聚体复合物表达的变化，采用电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)观察NF-κB DNA结合活性的变化。　　2 p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580对脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中NF-κB p50、NF-κB p50/p65二聚体复合物、NF-κB DNA结合活性的影响　　具体分组如下：①DMSO+CIP+Ⅱ组(n=18)；②SB203580+CIP+Ⅱ(n=18)。脑缺血预处理前30 min侧脑室注射3％DMSO或SB2035805nmol，然后夹闭双侧颈总动脉3 min作为脑缺血预处理，再灌注2天后，再次夹闭双侧颈总动脉8 min作为损伤性缺血，而后恢复再灌注。　　于末次缺血后即刻(0 min)、3 h、6 h、1 d、4 d、7d时取海马脑组织(每个时间点n=3)，探讨p38 MAPK信号转导通路对NF-κB p50蛋白、NF-κB p50/p65二聚体复合物、NF-κB DNA结合活性的影响。　　3 NF-κB的特异性抑制剂BAY11-7082对脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中GLT-1蛋白表达的影响　　具体分组如下：@DMSO+CIP+Ⅱ组(n=18)；②BAY11-7082+CIP+Ⅱ(n=36)。脑缺血预处理前30分钟侧脑室注射3％DMSO或BAY11-7082，再灌注2天后，夹闭双侧颈总动脉8 min作为损伤性缺血，而后恢复再灌注。根据BAY11-7082剂量不同，又分成1.25 nmol、2.5nmol2个亚组，每个亚组n=18。　　于末次缺血后即刻(0 min)、3 h、6 h、1 d、4 d、7 d时取海马脑组织(每个时间点n=3)，采用Western blot法观察GLT-1蛋白的表达，研究NF-κB的特异性抑制剂BAY11-7082对GLT-1蛋白表达的影响。　　结果：　　1脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中NF-κB p50的表达及SB203580对其影响　　采用Western blot方法观察了在脑缺血耐受诱导过程中，大鼠海马CA1区NF-κB p50蛋白的的表达。　　Sham组，即刻(0 min)时间点NF-κB p50有一定量的表达，但表达量较少。与即刻时间点相比，其余各时间NF-κB p50表达量均未发生明显变化(P＞0.05)。　　CIP组3 min全脑缺血后，即刻(0 min)时间点NF-κB p50蛋白的表达量较少。与即刻时间点相比，15 min、30 min时间点其表达有所上调，但差异无显著性(P＞0.05)；3 h、6 h时间点其表达明显升高(P＜0.05)；其余时间点均无显著差异(P＞0.05)。　　缺血打击组在全脑缺血8 min后，NF-κB p50在即刻时间点既有一定量的表达。与即刻时间点相比，在15 min时间点NF-κB p50蛋白表达有所上调(P＜0.05)，30 min时间点达到高峰(P＜0.01)；3 h、6 h、1 d、2 d时间点此蛋白的表达有所下调，但仍明显高于即刻时间点(P＜0.05)；4 d、7 d时间点NF-κB p50的表达与即刻时间点相比无显著差异(P＞0.05)。　　在DMSO+CIP+Ⅱ组，0 min、3 h、6 h、1 d、4 d、7 d等6个时间点NF-κB p50的表达均较高。与DMSO+CIP+Ⅱ组各个相应时间点相比，SB203580+CIP+Ⅱ组NF-κB p50蛋白的表达在各个时间点均显著降低(P＜0.05)。表明，p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580能够有效抑制脑缺血耐受诱导过程中NF-κB p50的上调。　　2脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中NF-κB p50/p65二聚体复合物的表达及SB203580对其影响　　通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)的方法研究了脑缺血耐受诱导过程中，大鼠海马CA1区NF-κB p50/p65二聚体复合物的表达。　　Sham组NF-κB p50/p65二聚体复合物在0 min、15 min、30 min、3 h、6 h时间点有一定数量的表达。与0 min时间点相比，15 min、30 min、3 h、6 h时间点p50/p65二聚体复合物的表达有所上调，但差异无显著性(P＞0.05)；假手术1 d后NF-κB p50/p65二聚体复合物的表达明显下调。　　CIP组3 min全脑缺血后，即刻(0 min)时间点NF-κB p50/p65二聚体复合物的表达量较少。与即刻时间点相比，此二聚体复合物的表达在15 min时间点明显上调(P＜0.01)。30 min、3 h虽有所下降，但仍明显高于即刻时间点(p＜0.05)。6 h、1 d、2 d表达量维持在一定水平，与即刻时间点相比无显著差异(P＞0.05)。4 d、7 d时此二聚体复合物的表达比即刻时间点明显减少(P＜0.05)。　　缺血打击组在全脑缺血8 min后，即刻(0 min)时间点NF-κB p50/p65二聚体复合物的表达量较少。与即刻时间点相比，NF-κB p50/p65复合物在15 min、30 min、3 h表达明显升高(P＜0.05)，p50/p65核转移明显增强，以30 min最为显著。其余时间点与即刻时间点相比，均无显著性差异(P＞0.05)。　　在CIP+缺血打击组，即刻(0 min)时间点NF-κB p50/p65二聚体复合物有一定的表达量，但表达量较少。与即刻时间点相比，此二聚体复合物在15 min、30 min、3 h、6 h表达明显上调(P＜0.01)；1 d、2 d时间点其表达虽有所下调，但仍显著高于即刻时间点(P＜0.05)。4 d、7 d时此二聚体复合物的表达与即刻时间点相比，均无显著性差异(P＞0.05)。　　在DMSO+CIP+Ⅱ组中，0 min、3 h、6 h、1 d、4 d、7 d等6个时间点NF-κB p50/p65二聚体复合物表达均较高。与DMSO+CIP+Ⅱ组各个相应时间点相比，SB203580+CIP+Ⅱ组的NF-κB p50/p65二聚体复合物的表达在各个时间点均显著降低(P＜0.05)。上述结果表明，5 nmol p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580能够有效阻断脑缺血耐受诱导过程中核内NF-κB p50/p65二聚体数量的上调。　　3脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中NF-κB的DNA结合活性及SB203580对其影响　　我们采用电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)的方法检测大鼠海马CA1区胞核内NF-κB的DNA结合活性。　　在CIP组，即刻(0 min)时间点NF-κB具有一定的DNA结合活性。与即刻时间点相比，NF-κB在15 min时活性显著增强，并且达到高峰(P＜0.01)。30 min、3 h虽有所下降，但仍明显高于即刻时间点(P＜0.05)。6 h、1 d、2 d时结合活性维持在一定水平，与即刻时间点相比无显著差异(P＞0.05)。4 d、7 d时NF-κB结合活性比即刻时间点明显降低(P＜0.05)。　　缺血打击组在全脑缺血8 min后，即刻(0 min)时间点NF-κB具有一定的DNA结合活性。与即刻时间点相比，大鼠海马CA1区NF-κB活性在15 min、30 min、3 h显著增强(P＜0.01)，以30 min较为显著；其余时间点均无显著差异(P＞0.05)。　　在CIP+缺血打击组，CIP+缺血打击组NF-κB的DNA结合活性。即刻(0 min)时间点NF-κB具有一定的DNA结合活性。与即刻时间点相比NF-κB活性在15 min开始增强，于30 min、3 h明显增强(P＜0.01)，在6 h达到高峰；1 d、2 d时间点虽有所降低，但仍显著高于即刻时间点(P＜0.05)。4 d、7 d时间点NF-κB活性与即刻时间点相比无显著差异(P＞0.05)。　　在DMSO+CIP+Ⅱ组中，0 min～7 d的各个时间点NF-κB的DNA结合活性均较高。与DMSO+CIP+Ⅱ组各个相应时间点相比，SB203580+CIP+Ⅱ组的NF-κB的活性在各个时间点均显著降低(P＜0.01)。上述结果表明，5nmol p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580能够有效阻断脑缺血耐受诱导过程中核内NF-κB的DNA结合活性上调。　　4脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中NF-κB的特异性抑制剂BAY11-7082对GLT-1蛋白表达的影响　　采用Western blot方法观察了在脑缺血耐受诱导过程中，NF-κB的特异性抑制剂BAY11-7082对GLT-1蛋白表达的影响。　　在DMSO+CIP+Ⅱ组，0 min、3 h、6 h、1 d、4 d、7 d共6个时间点GLT-1的表达均较高。与DMSO+CIP+Ⅱ组各个相应时间点相比，1.25nmolBAY11-7082+CIP+Ⅱ组GLT-1蛋白的表达在各个时间点均显著降低(P＜0.05)。2.5 nmol BAY11-7082亦导致GLT-1蛋白的表达在各个时间点均显著降低(P＜0.05)。上述结果表明，NF-κB的特异性抑制剂BAY11-7082能够显著下调GLT-1的表达。　　小结：　　1在体脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中，NF-κB被激活，即表现为：NF-κB p50蛋白表达上调；NF-κB发生二聚体化，并由胞浆转位至胞核；NF-κB的DNA结合活性增强。　　2 p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580下调该过程中NF-κB p50蛋白的表达、下调NF-κB p50/p65的表达二聚体复合物的表达、抑制NF-κB的DNA结合活性。　　3 NF-κB的特异性抑制剂BAY11-7082通过抑制NF-κB的活化来阻断脑缺血预处理所诱导的GLT-1表达上调。　　结论：NF-κB在脑缺血预处理激活p38 MAPK上调GLT-1表达诱导脑缺血耐受中发挥作用。