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胰腺癌细胞平衡核苷载体及将其阻断后对5-FU摄取的影响研究生:王晶敏导师:刘胜利东南大学医学院核苷载体ENTs在肿瘤细胞膜表面的数量可能与肿瘤对化疗药物耐药有关,阻断种类载体可能影响化疗药物在细胞内的浓度.该文测定PANC-l单细胞ENTs数量,并研究阻断细胞ENTs后对摄取5-FU的影响.PANC-1细胞膜ENTs的定性及定量研究目的:对PANC-l细胞膜ENTs定性和定量.方法:将PANC-1在含有潘生丁(100μ M)的培养基中温育8min-2 hr,在荧光显微镜下直接观察细胞表面潘生丁发出的荧光.细胞培养至约2× 10<7>后,在含有潘生丁(100μ M)的培养基中温育8min、15min、l hr、2 hr,收集细胞并用乙腈裂解,荧光分光光度计测定细胞悬液中潘生丁含量,再根据平行悬液中细胞数量计算单个细胞ENTs的数量.结果:温育8 rmin后即能观察到细胞的荧光环.潘生丁能很快与单细胞表面ENTs结合,15 min即可达高峰(20.2l× 10<-19>mol),相当于单细胞有1.25×10<5>个ENTs,以后维持于平台.结论:用荧光法可对细胞ENTs进行定性和定量.阻断胰腺癌细胞ENTs对5-FU在细胞内浓聚的影响目的:研究阻断ENTs后对PANC-l转运5-FU能力的影响.方法:细胞培养至约2×10<7>后,分为ENTs阻断组和ENTs非阻断组.ENTs阻断组培养基中加入潘生丁(100μ M)和5-FU100pg/nl,ENTs非阻断组培养基中仅加入5-FU(100pg/nl).分别作用15min、30min、1 hr、2 hr、4 hr后收集细胞.用乙腈裂解细胞后,毛细管区带电泳测定5-FU含量,根据平行悬液中细胞数量和单细胞体积计算单细胞中5-FU浓度.结果:ENTs阻断组细胞内5-FU浓度上升缓慢,但2小时后达138.3±9.77pg/nl,随后曲线处于高峰平台.ENTs非阻断组细胞内5-FU浓度在30分钟内迅速升高并处于曲线平台,但高峰值仅达到83.75±5.33pg/nl.明显低于阻断组的最高值浓度(p<0.01).结论:阻断胰腺癌细胞膜上ENTs可增加5-FU在细胞内的浓聚.