【摘 要】
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人体血液中的白细胞介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）和白细胞介素12p40（Int-erleukin-12p40,IL-12p40）的浓度在正常生理状态下均低于12.50 pg m L-1,过量分泌的IL-1β和IL-12p40会诱导自身炎症性疾病的产生。因此,开发灵敏的IL-1β和IL-12p40检测方法至关重要。本实验首先利用E.coli原核表达系统表达并获得mIL-1β（M
【基金项目】
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湖北省技术创新专项重大项目重要牛病多联快速现场检测技术研发（编号2020BBA055）；
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人体血液中的白细胞介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）和白细胞介素12p40（Int-erleukin-12p40,IL-12p40）的浓度在正常生理状态下均低于12.50 pg m L-1,过量分泌的IL-1β和IL-12p40会诱导自身炎症性疾病的产生。因此,开发灵敏的IL-1β和IL-12p40检测方法至关重要。本实验首先利用E.coli原核表达系统表达并获得mIL-1β（Mouse IL-1β,mIL-1β）和mIL-12p40蛋白;然后通过杂交瘤技术和小鼠腹水诱生法获得mIL-1β和m I L-12p40的单克隆抗体,采用棋盘滴定法确定最佳配对抗体;在此基础上成功建立了分别用于mIL-1β和mIL-12p40的双抗体夹心ELISA检测方法,显示出良好的商业应用前景。主要取得成果如下:（1）获得7株能够稳定、高效分泌抗mIL-1β单克隆抗体的杂交瘤细胞株（1B7、2A12、2C1、3A6、3B1、3C7、5F6）;以3B1为捕获抗体、5F6为检测抗体,成功建立了mIL-1β双抗体夹心ELISA方法。此方法检测mIL-1β的线性范围为11.72 pg m L-1-1500 pg m L-1（y=0.0015x+0.0227,R~2=0.9943）,检测限为1.55 pg m L-1（2σ）,优于多数商业化试剂盒。（2）获得6株能够稳定、高效分泌抗mIL-12p40单克隆抗体的杂交瘤细胞株（1C3、1B4、1G5、1H3、3E7、5G3）;以1C3为捕获抗体、1G5为检测抗体,成功建立mIL-12p40双抗体夹心ELISA方法。此方法检测mIL-12p40的线性范围为62.5pg m L-1-2000 pg m L-1（y=0.0003x+0.0297,R~2=0.9829）,检测限为10 pg m L-1（2σ）,与部分商业化试剂盒相当。
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