【摘 要】
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目的建立D-半乳糖联合Aβ25-35注射所致AD大鼠模型,观察酒黄精、炆黄精、黑豆黄精及生品黄精防治AD的药效差别,探讨其作用机制,并初步阐明不同炮制品化学成分与药效差异之间的联系。方法1.黄精不同炮制品及生品防治AD的药效比较:(1)按照中国药典(2020版)要求,以葡萄糖含量为指标对黄精不同炮制品及生品进行质量控制。(2)雄性SD大鼠随机分为(1)假手术组;(2)模型组(D-半乳糖100mg/
【基金项目】
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《江西省主要学科学术和技术带头人资助计划项目》(20182BCB22005); 《江西省研究生创新专项资金项目》(YC2020-S371);
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目的建立D-半乳糖联合Aβ25-35注射所致AD大鼠模型,观察酒黄精、炆黄精、黑豆黄精及生品黄精防治AD的药效差别,探讨其作用机制,并初步阐明不同炮制品化学成分与药效差异之间的联系。方法1.黄精不同炮制品及生品防治AD的药效比较:(1)按照中国药典(2020版)要求,以葡萄糖含量为指标对黄精不同炮制品及生品进行质量控制。(2)雄性SD大鼠随机分为(1)假手术组;(2)模型组(D-半乳糖100mg/kg+Aβ25-35 10μg/侧);(3)多奈哌齐组(1mg/kg);(4)生黄精组(6g生药/kg),(5)酒黄精组(6g生药/kg),(6)炆黄精组(6g生药/kg);(7)黑豆黄精组(6g生药/kg),每组14只。除假手术组外,各组大鼠D-半乳糖注射2周后,连续灌胃给药35天。D-半乳糖注射3周后,双侧海马注射Aβ25-35。Openfield实验、新物体识别实验和Morris水迷宫实验观察黄精不同炮制品及生品对AD模型大鼠学习记忆能力的影响;H&E染色和尼氏染色观察黄精不同炮制品及生品对AD模型大鼠海马形态学的影响;免疫组化法检测黄精不同炮制品及生品对AD模型大鼠海马区Aβ1-42、p-tau404蛋白表达水平的影响;ELISA法检测黄精不同炮制品及生品对AD模型大鼠脑组织神经相关炎症因子表达水平及胆碱功能的影响。然后对黄精不同炮制品及生品防治AD的药效进行综合评分。2.黄精不同炮制品及生品防治AD的机制研究:Western Blot法检测黄精不同炮制品及生品对AD模型大鼠海马TLR4/NF-κB/NLRP3炎症通路相关蛋白表达的影响;H&E染色、免疫组化法观察黄精不同炮制品及生品对AD模型大鼠结肠形态学及通透性的影响;Illumina Mi Seq高通量测序技术分析黄精不同炮制品及生品对AD模型大鼠肠道微生物的影响;从“微生物-肠-脑”轴探讨黄精不同炮制品及生品防治AD的机制。3.黄精不同炮制品及生品化学成分的比较:UPLC-Q/TOF-MS对酒黄精、炆黄精、黑豆黄精及生黄精进行化学成分检测,结合SIMCA-P14.0软件,比较黄精三种炮制品及生品的化学成分差异,探讨成分与药效差异的关联性。结果1.黄精不同炮制品及生品防治AD的药效对比:黄精不同炮制品及生品均可改善AD大鼠记忆能力和认知功能障碍;改善脑组织病理学变化,恢复海马区细胞形态;减少海马区Aβ1-42和p-Tau404蛋白表达;降低脑组织APP水平,提高AD大鼠胆碱能功能,下调海马组织IL-6和TNF-α含量。通过综合评分发现,防治AD药效酒黄精>生黄精>黑豆黄精>炆黄精。2.黄精不同炮制品及生品防治AD的机制研究:黄精不同炮制品及生品可抑制海马TLR4/NF-κB/NLRP3炎症信号通路相关蛋白表达;改善AD大鼠结肠粘膜屏障,增加Claudin-1和ZO-1蛋白表达;抑制肠道Enterorhabdus、Firmicutes等的异常增殖。3.黄精不同炮制品及生品化学成分的差异:在黄精不同炮制品及生品中鉴别出20种差异化合物,包含12个甾体皂苷类、3个生物碱类、3个苯丙素类、2个黄酮类化合物。咖啡酸在黑豆黄精中含量最高,其他两种苯丙素类化合物在酒黄精中含量最高;生物碱类化合物在酒黄精中含量较高;甾体皂苷类化合物含量:生黄精>酒黄精>黑豆黄精>炆黄精;黄酮类化合物在炆黄精中含量较高。酒黄精防治AD的药效评分最高与甾体皂苷类、生物碱类、苯丙素类、黄酮类四种化合物含量升高有关,而炆黄精评分最低,与其甾体皂苷类成分减少有关。结论1.黄精不同炮制品及生品有防治AD的作用,但药效上有差别:酒黄精>生黄精>黑豆黄精>炆黄精。2.黄精不同炮制品及生品可能通过调节肠道Enterorhabdus、Firmicutes异常增殖,改善肠道粘膜屏障,调控海马TLR4/NF-κB/NLRP3通路来抑制大脑神经炎症反应,从“微生物-肠-脑”轴发挥治疗AD的作用。3.黄精不同炮制品及生品防治AD药效产生差别的原因与不同炮制品其苯丙素类、生物碱类、黄酮类和甾体皂苷类等化合物的含量不同有关。
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