【摘 要】
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为保障我国转基因产品标识管理制度的顺利实施,本文主要从两个方面开展了转基因产品检测技术研究。1.适合转基因大豆GTS 40-3-2复合PCR检测的标准分子研制:标准物质在转基因
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为保障我国转基因产品标识管理制度的顺利实施,本文主要从两个方面开展了转基因产品检测技术研究。1.适合转基因大豆GTS 40-3-2复合PCR检测的标准分子研制:标准物质在转基因产品的定量分析中非常重要,是定量的标尺。针对目前使用的标准质粒分子不能用于复合PCR检测的缺点,本文以转基因大豆品系GTS 40-3-2(Roundup Ready Soybean, RRS)为研究对象,研制了一种适合RRS复合PCR检测的标准质粒分子。此质粒分子分别将RRS的三个外源检测片段(CaMV35s, NOS和RRS品系特异性片段)和大豆内标准基因(Lectin)片段构建在质粒的不同插入位点上,并通过实验方法对此质粒分子在复合PCR中的适用性进行了证明。复合PCR定量结果表明,新构建的质粒分子对大豆样品定量分析的偏差在10%以内,检测下限和定量下限分别是10和50个拷贝,说明此质粒分子可以代替传统的标准物质,作为RRS复合定量检测的标准物质。此标准分子克服了现有质粒不能用于复合检测的缺点,提高检测通量,减少检测时间和成本。2.番茄内标准基因国际协同验证:本文在实验室已获得的番茄和水稻内标准基因Lat52和SPS工作基础上,组织国际协同实验,邀请国内外14个实验室分别对番茄和水稻内标准基因Lat52和SPS进行了验证。番茄验证实验返回的13个实验室的结果表明,Lat52基因具有内标准基因的三个特征,即种间特异性、种内非特异性和恒定的低拷贝数。Lat52基因定性PCR检测灵敏度为0.1%,定量PCR检测下限和定量下限为10个拷贝。定量PCR对8个番茄盲样分析的偏差在1.94%到10.64%之间,说明Lat52适合作为番茄的内标准基因,对转基因番茄样品进行定性和定量PCR检测。
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