【摘 要】
：
目的:研究前列腺癌细胞PC-3中RNA结合蛋白EIF3B对外泌体中mi R-100-5p表达水平的影响,进而探明外泌体mi R-100-5p对巨噬细胞吞噬功能的影响。方法:1、使用透射电镜以及纳米粒径分析鉴定外泌体,Western Blot鉴定外泌体表面标志蛋白;2、采用q PCR检测PC-3、RWPE-1外泌体中mi R-100-5p的表达水平,使用PKH67标记PC-3来源外泌体诱导巨噬细胞,
论文部分内容阅读
目的:研究前列腺癌细胞PC-3中RNA结合蛋白EIF3B对外泌体中mi R-100-5p表达水平的影响,进而探明外泌体mi R-100-5p对巨噬细胞吞噬功能的影响。方法:1、使用透射电镜以及纳米粒径分析鉴定外泌体,Western Blot鉴定外泌体表面标志蛋白;2、采用q PCR检测PC-3、RWPE-1外泌体中mi R-100-5p的表达水平,使用PKH67标记PC-3来源外泌体诱导巨噬细胞,qPCR检测PC-3-exo-M中miR-100-5p的表达;3、采用免疫磁珠法提取人外周血单核细胞,体外诱导为巨噬细胞;4、使用吞噬试剂盒检测PC-3-exo-M以及转染mi R-100-5p inhibitor后巨噬细胞的吞噬功能;5、使用碧云天活性氧ROS检测试剂盒检测各组巨噬细胞ROS的含量;6、采用q PCR、Western Blot检测mi R-100-5p抑制后靶基因NOX4的表达水平,双荧光素酶报告实验验证mi R-100-5p与NOX4结合;7、使用生物素标记的mi R-100-5p探针下拉与其结合的蛋白,采用Western Blot技术检测样品和外泌体中EIF3B的表达量;8、采用q PCR检测PC-3、RWPE-1细胞中EIF3B的m RNA水平;9、使用EIF3B si RNA转染PC-3细胞,Western Blot检测敲低效果,q PCR检测EIF3B敲低后PC-3外泌体中mi R-100-5p的表达变化。结果:1、透射电镜拍摄的外泌体呈凹陷杯形,纳米粒径分析外泌体大小在100 nm左右,WB鉴定外泌体表达CD63和Tsg101蛋白;2、前列腺癌细胞PC-3来源外泌体中mi R-100-5p表达较正常前列腺上皮细胞RWPE-1来源的外泌体显著增高,前列腺癌细胞PC-3来源的外泌体进入巨噬细胞,mi R-100-5p在此PC-3-exo-M细胞中表达显著升高;3、成功提取单核细胞并体外诱导为巨噬细胞;4、前列腺癌细胞PC-3来源的外泌体抑制了巨噬细胞的吞噬功能,抑制mi R-100-5p的表达后巨噬细胞吞噬功能增强;5、与M0相比PC-3-exo-M中ROS水平下降,抑制mi R-100-5p的表达后PC-3-exo-M内活性氧含量上升;6、NOX4为mi R-100-5p的靶基因,下调mi R-100-5p的表达,NOX4蛋白水平上升;7、mi R-100-5p可与EIF3B蛋白结合;8、PC-3细胞中EIF3B的m RNA水平较正常前列腺上皮细胞RWPE-1上升;9、抑制PC-3细胞中的EIF3B下调了PC-3来源外泌体中mi R-100-5p的表达。结论:1、前列腺癌细胞PC-3来源的外泌体是巨噬细胞内mi R-100-5p的重要来源,mi R-100-5p进入PC-3外泌体的过程主要是由EIF3B蛋白调节的。2、PC-3-exo中mi R-100-5p抑制了巨噬细胞的吞噬功能,其机制是通过抑制NOX4表达减少巨噬细胞ROS产生。
其他文献
脑胶质瘤是中枢神经系统中高度恶性的原发肿瘤,目前的治疗手段只能起到缓解作用,其具有治疗抵抗,易复发等特点,致死率高,病人的中位生存期仅有12～15个月。脑胶质瘤干细胞（glioma stem cell,GSC）是脑胶质瘤中一类具有自我更新、多向分化潜能和肿瘤形成能力的细胞,越来越多的证据表明,GSC促进肿瘤抵抗放化疗,最终导致癌症复发。如何调控胶质瘤干细胞,将成为高级别胶质瘤治疗的关键。肿瘤细胞在
背景:氧化铁纳米颗粒因独特的物理化学性能和优异的磁学特性,已被广泛应用于药物递送、核磁成像和疾病诊断。目前已有少量氧化铁纳米药物被美国食品药品监督管理局批准上市并进入临床应用,具体包括核磁成像造影对比剂（Feridex IV和Resovist）、静脉补铁剂（Ferumoxytol）、磁滞热疗药物（Cell Search）等。而静脉注射的氧化铁纳米颗粒主要聚集在肝脏和脾脏,且因结合血清蛋白质形成“纳
贝氏柯克斯体（Coxiella burnetii）是人畜共患病Q热的病原体,又称Q热立克次体,现归属于军团菌目柯克斯体科柯克斯体属,在其体外培养技术发明之前一直被认为是专性胞内寄生菌。C.burnetii主要通过气溶胶途径在人与动物间传播,且感染量极低。人感染C.burnetii后通常表现为流感样症状,伴有乏力高热等体征,多数情况下可自愈,但也可引发慢性和持续性感染,表现为肝炎、心内膜炎等症状,甚
糖代谢紊乱包括空腹血糖受损、糖耐量减低及糖尿病。糖代谢紊乱诱发的糖尿病是威胁人类健康的三大慢性非传染病之一,可引发急性和慢性并发症,造成机体内多种器官组织损伤,严重危害人类健康。金黄色葡萄球菌是一种广泛定植于人体内的革兰氏阳性条件致病菌。已有的研究发现,肥胖、糖尿病和胰岛素抵抗患者比健康人更容易定植金黄色葡萄球菌,提示金黄色葡萄球菌可能参与了宿主糖代谢紊乱。本论文在课题组已有的工作基础上,通过研究
目的:探究宿主细胞蛋白TMED4对柯萨奇B组3型病毒（CVB3）复制的影响及机制。方法:1.分离提取原代心肌细胞:采用胰蛋白酶消化法和机械法相结合,从新生乳鼠心脏中分离出原代心肌细胞。并利用免疫荧光法对原代细胞进行鉴定。2.CVB3（MOI=5）感染原代心肌细胞和He La细胞不同时间点后,收集蛋白样品,Western blot检测CVB3感染不同时间后TMED4表达量的变化。3.构建pShutt
在含能材料中,金属燃料占有十分重要的地位。硼粉由于理论上的质量热值和体积热值很高,成为了推进剂、烟火药中的重要组分。但硼粉点火困难,高粘性的表面氧化膜抑制了硼粉与氧气的接触,使其高热值、高能量难以被释放出来。为解决此问题,在硼粉中加入了镁、铝等元素进行合金化,以此来提升硼粉的活性、燃烧热值、能量释放效率等性能。通过真空烧结的方法制备了MgB2、AlB2、Mg0.5Al0.5B2以及一系列不同原子比
目的研究纤维母细胞生长因子3（Fibroblast growth factors,FGF3）对前丘脑γ-氨基丁酸能抑制性神经元（GABAergic inhibitory neurons）轴突的导向作用,探讨FGF3对丘脑神经网络形成的影响。方法免疫荧光法检测FGF3及γ-氨基丁酸能标志基因在鸡胚间脑的表达及定位。采用Di I示踪法检测早期γ-氨基丁酸能神经元轴突走向。三维凝胶共培养实验证明FGF3
目的探讨褪黑素（Melatonin,MT）通过调控卵巢巨噬细胞的极化在激活内源性卵巢生殖干细胞（Ovarian germinal stem cells,OGSCs）中的作用。研究方法使用氯化钴（CoCl2）刺激诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞缺氧,建立体外巨噬细胞缺氧模型,同时,探索缺氧环境下巨噬细胞Mφ极化状态。进而探索MT对巨噬细胞Mφ缺氧改善和极化状态调节作用;通过卵巢巨噬细胞共培养,探索M
肝癌是世界范围内高发的恶性肿瘤,也是导致癌症相关死亡的第二大诱因,严重威胁人类健康,而肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是最主要的原发性肝癌类型。TGF-β在肝癌的发展过程中发挥着双重作用;它虽然在早期抑制癌细胞生长,但随着肿瘤发展被转变为一个促癌因子,促进癌细胞生长、迁移与转移等。TGF-β结合受体后,刺激R-Smad（Smad2/3）与Smad4形成复合物并向
在中枢神经系统中,少突胶质细胞由少突胶质前体细胞分化而来。成熟的少突胶质细胞能够包绕轴突形成髓鞘,使动作电位的跳跃式传导成为可能。少突胶质细胞的病理学改变是多种神经疾病的病因之一,包括多发性硬化症、精神分裂症和阿尔茨海默病等。跨膜蛋白108（Transmembrane protein 108,Tmem108）位于人类染色体3q21上,研究发现跨膜蛋白108是多种神经类疾病的易感基因,如精神分裂症,