β-肾上腺素能受体（β—AR）分布于几乎所有的血管平滑肌细胞，通过介导舒张血管效应对于心血管系统血液动力学的稳定发挥重要的调节作用。近年研究表明β₁-和β₂-AR两种亚型共存于血管中，除了介导负性变力效应外，还参与调节血管平滑肌细胞的其他生理学功能，但亚型特异性作用以及内在机制尚未阐明。本研究旨在观察β₁-和β₂-AR对于动脉平滑肌细胞迁移、凋亡和增殖的亚型特异性调控效应，并进一步探讨可能的信号转导机制。 第一部分：用特异性的β₁-AR和β₂-AR激动剂持续刺激原代培养的Wistar大鼠胸主动脉平滑肌细胞，以细胞划片法观察在5％胎牛血清存在情况下激动β₁-AR或β₂-AR对VSMC迁移的影响，结果发现β₁-AR和β₂-AR对于VSMC迁移的调控有明显差异。β₁-AR可剂量依赖性地抑制5％FBS诱导的VSMC迁移，NE为10^-6M浓度时细胞迁移距离仅为对照组的58.8±7.95％。PKA抑制剂PKI14-22、钙通道阻滞剂硝苯地平均不能逆转β₁-AR引起的迁移抑制效应，而PTIO、L-NAME则可逆转β₁-AR激动对VSMC迁移的抑制。与β₁-AR的迁移抑制作用不同，β₂-AR对迁移无明显影响。但在百日咳毒素阻断Gi信号、过表达βARKct抑制Gβγ活性以及LY294002阻断P13K通路后，β₂-AR激动可使细胞迁移明显受到抑制（为对照组的37.45±5.12％，P＜0.01），并且激动β₂-AR可明显增加细胞内Akt和ERK1／2的磷酸化水平。而在过表达βARKct的情况下，PTIO和L-NAME亦可阻断β₂-AR的抑制迁移效应。 第二部分：应用携带β₁-AR或β₂-AR重组片段的腺病毒转染血管平滑肌细胞，制备特异性受体亚型过表达模型，采用HE染色、中国人民解主欠月阵月民医金生修学院中国入民解放军总医院博士学位论文摘要Hoeehst33342、AnnexinV一Pl双标的流式细胞仪分析（FCM）以及DNA琼脂糖凝胶电泳四种方法检测内源性以及过表达两种受体亚型对于细胞凋亡的影响。结果显示在维持量血清培养基（l%FBS）中，内源性或过表达D，一和p;厂AR激动都可诱导细胞凋亡，Hoechst染色阳性率显著高于对照组（P<O.01），FCM检测的细胞存活率降低（P<0 .01）。其中pZ一AR的促凋亡效应明显强于p;一AR。PKA和Ca2+信号不参与介导两种p一AR亚型引起的VSMC凋亡（P>0.05）。而以PTIO和L一NAME阻断NO信号则明显抑制p一ARs的凋亡效应，Hoechst染色阳性率降低（P<0.01），细胞存活率升高（P<0 .01）。此外，p，一和pZ一AR激活可明显降低磷酸化ERKI/2蛋白水平，提示MAPK信号途径可能参与介导p一ARS的促凋亡作用。 第三部分:应用MTT比色法和细胞计数法初步研究了p，一AR和pZ一AR激动对于VSMC增殖的影响。结果发现二者激动都可引起细胞数目下降，其中pZ一AR的抑制效应要强于p，一AR。在激动剂刺激第3天两种亚型对于增殖的抑制作用最强。 结论:1.p，一AR和pZ一AR对于VSMC迁移的调控有明显差异，p;^AR可抑制5%FBS诱导的VSMC迁移，而p 2.AR对迁移无明显效应。2.p，一AR可通过NO信号通路抑制VSMC迁移，此过程不依赖PKA和Ca，十的激活。3.pZ一AR分别通过No信号通路和Gi一G py一PI3K一Akt信号通路发挥抑制和促进细胞迁移的双重作用。4.在维持量血清培养基中，p，一AR和pZ一AR都可以诱导VSMC凋亡，其中D:一AR的效应略强于p，一AR。二者的诱导凋亡效应都不依赖于PKA和c扩十信号通路的激活，而NO信号活化以及ERKI/2信号的下调可能参与介导p一AR的促凋亡效应。5.pl一AR和p厂AR两种亚型激动后都可以抑制VSMC的增殖，其中pl一AR的抑制效应较p:一AR弱。中国人民解方义军军医自比修学花赶中国人民解放军总医院博士学位论文摘要 综上所述，p，一AR和pZ一AR系统对于血管平滑肌细胞迁移、凋亡和增殖的调控存在差异性和复杂性，p一AR可能通过对上述生物效应的调节参与动脉粥样硬化、PTCA术后再狭窄以及原发性高血压等疾病的发生和发展过程。