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益生菌制品因其特有的无毒副作用,能调节人体微生物区系促进健康,日益成为功能食品研究中的焦点。本课题采用活体外的试验方法,从大量菌株中筛选出能够抵抗人的上消化道不良环境,以高活力到达下部肠道并能够粘附于肠道上皮而定植于其中,发挥其生理功效的益生菌潜力菌株。 共有14株备选菌株用于本实验,其中两株乳杆菌(A,PB1)、两株双岐杆菌(PBA,INF)、两株球菌(M1,PB2)和四株芽孢杆菌(M2,T2,T3,PB3)是用酸化MRS培养基和改良TPY培养基,在有氧和厌氧两种培养条件下,从市售微生态制剂中分离的;其余的两株粪肠球菌A31,A30和两株嗜酸乳杆菌A878,A11购于中科院微生物所菌种保藏中心(CGMCC)。 利用接近正常人大肠组织分化程度较高的细胞系CCL-187细胞单层培养物作为肠细胞模型,与细菌混合培养测定细菌的粘附能力,结果表明球菌M1和PB2的粘附能力最强,平均每100个类上皮细胞上可粘附的菌数达200以上;乳杆菌PB1、球菌A31、双歧杆菌INF和PBA粘附能力次之,100个细胞上粘附菌数为100以上;芽孢杆菌除M2外,其余各菌的粘附数量都不到50。 用盐酸,胃蛋白酶,胰蛋白酶,新鲜牛胆汁活体外模拟胃肠道环境,监测上消化道不利环境对菌体活性的影响,结果表明:乳杆菌A878、A、PB1,球菌M1、A30、A31,双歧杆菌PBA、INF,芽孢杆菌M2等菌株对胃液和胰液都有较强耐受能力,在胃液和胰液中分别培养3h利4h后活菌计数,仍能保证95%以上存活,尤其有乳蛋白存在时,存活儿率更大;乳杆菌PB1、A,双歧杆菌PBA利球菌M1、A30、A31都能在含胆汁培养基中较好生长,其它菌株虽受到胆汁的抑制,但仍能存活并生长。 将新鲜菌种接种于添加胆固醇的培养基中,在有胆汁存在的厌氧条件下培养,各受试菌株降胆固醇数量在25%~54%之间变化,其中粪肠球菌A30、A31,嗜酸乳杆菌A878,芽孢杆菌M2,乳杆菌PB1在生长过程中都能使环境中的胆固醇降低40%以上,是良好的降胆固醇备选菌株。 根据以上试验结果可以选定既能抵抗上消化道不良环境(pH值、胆汁和酶)而顺利通过胃肠转运到达回肠末端或大肠,又能定植于肠道中的菌株:球菌M1、A31,乳杆菌PB1,双歧杆菌PBA、INF,其中A31利PB1还具有较强降胆固醇潜力;上消化道抵抗能力利定植能力次之,但降胆固醇潜力较强的菌株:A30、A878和M2。初步鉴定菌株PBA为婴儿双歧杆菌,INF为长双歧杆菌M1为屎肠球菌PB1为嗜酸乳杆菌,M2为枯草芽孢杆菌。