论文部分内容阅读
目的:P2X3受体是一种新型疼痛受体。已有研究表明,P2X3受体在感觉神经元中表达,它可能在调节疼痛信息的传递上发挥作用。本研究采用足底注射P2X3受体激动剂,建立大鼠疼痛模型,观察大鼠的伤害性反应,并采用免疫组化的方法,测定大鼠背根神经节（DRG）上的P2X3受体,以及相应脊髓节段背角上的P物质受体NK1和谷氨酸受体NDMR1的表达。并于椎管内注射P物质和谷氨酸受体拮抗剂,进一步观察动物行为学变化及脊髓背角NK1和NDMR1的表达。旨在探讨P2X3受体在介导外周伤害刺激引起疼痛的作用机制。方法:1健康成年雄性SD大鼠30只,体重250—300g随机分为5组,每组6只（n=6）。A组:正常对照组（左后足底注射生理盐水100μl）;B组:左后足底注射P2X3受体激动剂ATP（1μmol/L ）100μl;C组:左后足底注射P2X3受体强效激动剂a、β-meATP （0.6μmol/L） 100μl;D组:左后足底注射P2X3受体强效激动剂和P2X3受体特异性拮抗剂a、β-meATP （ 0.6μmol/L ） 100μl +TNP-ATP （0.3μmol/L ）100μl;E组:左后足底注射P2X3受体激动剂和P2X3受体拮抗剂ATP（1μumol/L ）100μl +TNP-ATP （0.3μmoL/） 100Bμl。观察缩脚次数,每5分钟作为一个观察单位,持续观察一个小时。分离大鼠DRG。采用免疫组化的方法分别测定每组DRG上P2X3受体的表达及相应节段脊髓背角上的NK1和NDMR1的表达。2.成年SD雄性大鼠30只,随机分为5组,每组6只（n=6）。A组:正常对照组,大鼠椎管注射生理盐水50μl;B组:椎管注射P2X3受体拮抗剂TNP-ATP （0.3μmol/L） 100μl;C组:椎管注射谷氨酸受体拮抗剂（L-701,3142）5μg;D组:椎管注射P物质拮抗剂（S3144）,8μg,E组:椎管注射（L-701,3142+S3144）8μg +5μg。所有组别均在椎管注射后左后足底注射P2X3受体强效激动剂a、βme-ATP（0.6μmol/L）100μl,及椎管内注射0.1%二甲基亚枫10μl,动物行为学观察方法同前,取其相应节段的脊髓,采用免疫组化法分别测定各组相应节段脊髓背角神经元及星形胶质细胞上的NK1和NDMR1的表达。结果:1（1）大鼠行为学变化:大鼠足底注射生理盐水未出现伤害性行为学反应。B组和C组大鼠左后足底注射药物约5分钟左右出现明显的伤害性行为反应如咬尾、摆尾及缩脚等,20分钟左右最为明显,以C组最为明显,两组缩脚次数比较有显著统计学差异（P <0.01）应用拮抗剂之后缩脚次数明显减少,B组和E组比较有统计学差异,（P<0.01）,C组和D组比较有统计学差异（P<0.01）。（2）DRG上的P2X3受体表达:P2X3受体存在于DRG中小神经元的胞体,A组阳性细胞表达率为17.2±3.1%,B组为33.3±4.8%,C组为44.8±3.4%, D组为21.1±4.2%,E组为19.1±4.8%。A组和B组比较（P<0.05）,A组和C组比较（P<0.01）,B组和E组比较有统计学差异,（P<0.01）,C组和D组比较有统计学差异（P<0.01）。（3）NK1受体表达在脊髓背角神经元和星形胶质细胞上。脊髓背角神经元上的表达阳性率分别为A组16.8±3.7%、B组25.7±3.6%、C组40.0±6.1%、D组14.8±4.6%,E组14.7±2.5%。C组与A组比,（P<0.01）;B组与A组比（P<0.05）,C组与D组比（P<0.05）,B相与E组比（P<0.01）。星形胶质细胞上的表达阳性率分别为A组14.2±1.3%、B组26.7±3.3%、C组37.6±3.2%、D组15.8±1.2%,E组13.5±1.4%。C组与A组比,（P<0.01）;B组与A组比（P<0.05）,C组与D组比（P<0.05）,B相与E组比（P<0.01）。（4）NMDAR1受体也表达在脊髓背角神经元和星形胶质细胞上,脊髓背角神经元上的表达阳性率分别为A组18.6±3.9%、B组26.7±3.5%、C组45.0±6.7%、D组17.8±2.6%,E组16.3±2.7%。C组与A组比,（P<0.01）;B组与A组比（P<0.05）,C组与D组比（P<0.05）,B相与E组比（P<0.01）。星形胶质细胞上的表达阳性率分别为A组16.3±1.5%、B组28.6±3.4%、C组40.6±3.9%、D组12.8±1.4%,E组11.5±1.3%。C组与A组比,（P<0.01）;B组与A组比（P<0.05）,C组与D组比（P<0.05）,B相与E组比（P<0.01）。2（1）大鼠行为学变化:A组与B组大鼠均出现明显伤害性刺激反应,如添足、咬尾、缩脚等,但两组缩脚次数无明显差异（P>0.05）。而C组、D组分别与A组相比,缩脚次数明显少,（P<0.05）,E组与A组相比缩脚次数减少最为显著,（P <0.01）C组、D组分别与E组比较有显著统计学差异（P <0.01）。（2）脊髓背角神经元上NK1的表达阳性率分别为A组40.2±6.4%、B组40.1±4.5%、C组23.2±3.7%、D组23.4±3.7%,E组10.6±2.2%。A组与B组相比较无明显差异（P>0.05）C组、D组分别与A组相比,有统计学差异,（P<0.05）,C组、D组分别与E组比较有显著统计学差异（P <0.01）。星形胶质细胞上NK1的表达阳性率分别为A组37.2±4.4%、B组43.6±5.5%、C组18.4±3.7%、D组22.6±2.4%,E组12.6±2.0%。A组与B组相比较无明显差异（P>0.05）C组、D组分别与A组相比,有统计学差异,（P<0.05）,C组、D组分别与E组比较有显著统计学差异（P <0.01）。（3）脊髓背角神经元上NMDAR1的表达阳性率分别为A组37.8±5.9%、B组39.6±4.3%、C组25.8±4.6%、D组22.7±2.9%,E组11.5±1.7%。A组与B组相比较无明显差异（P>0.05）C组、D组分别与A组相比,有统计学差异,（P<0.05）,C组、D组分别与E组比较有显著统计学差异（P <0.01）。星形胶质细胞上NMDAR1的表达阳性率分别为A组34.2±4.3%、B组44.6±5.9%、C组21.8±4.2%、D组19.8±3.1%,E组13.7±1.6%。A组与B组相比较无明显差异（P>0.05）C组、D组分别与A组相比,有统计学差异,（P<0.05）,C组、D组分别与E组比较有显著统计学差异（P <0.01）。结论:1 P2X3受体主要表达在DRG上的中小神经元上。2大鼠疼痛是由P2X3受体介导,并和脊髓背角上的NK1和NDMR1受体激活有关。3 P2X3受体兴奋,可使DRG释放P物质和谷氨酸并与相应脊髓背角受体结合,介导疼痛信号传导。4脊髓背角上星形胶质细胞存在NK1和NDMR1受体该受体也可能参与P2X3受体介导的疼痛信号传导。