【摘 要】
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目的:研究吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)在烟曲霉菌性角膜炎中对中性粒细胞募集、吞噬和趋化功能的影响。方法:本实验分别在烟曲霉菌感染的中性粒细胞模型以及烟曲霉菌性角膜炎小鼠动物模型上观察了IDO对烟曲霉菌性角膜炎角膜感染程度的影响,以及IDO调控中性粒细胞募集、吞噬和趋化功能的相关机制。据此,本研究从三个方面加以证实:1、随机将C57BL/6小鼠分成损伤对照组、感染组,分别在1、3、5天观察小鼠角膜
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目的:研究吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)在烟曲霉菌性角膜炎中对中性粒细胞募集、吞噬和趋化功能的影响。方法:本实验分别在烟曲霉菌感染的中性粒细胞模型以及烟曲霉菌性角膜炎小鼠动物模型上观察了IDO对烟曲霉菌性角膜炎角膜感染程度的影响,以及IDO调控中性粒细胞募集、吞噬和趋化功能的相关机制。据此,本研究从三个方面加以证实:1、随机将C57BL/6小鼠分成损伤对照组、感染组,分别在1、3、5天观察小鼠角膜病变程度并收集角膜组织,PCR检测中性粒细胞相关炎症因子(Foxp3、IFN-γ、IL-1β、IL-17、IL-23、TGF-β)mRNA水平的表达;随机将C57BL/6小鼠分成损伤对照组、1-MT组、感染组、1-MT+感染组,感染烟曲霉菌后第3天在裂隙灯下观察各组小鼠的角膜感染情况,裂隙灯照相并进行临床炎症评分,明确比较各组小鼠角膜感染的严重程度。对各组小鼠角膜中中性粒细胞应用免疫荧光染色检测,确定细胞的定位及募集数量。采用MPO实验对中性粒细胞中髓过氧化物酶进行定量测定。C57BL/6小鼠提取的腹腔中性粒细胞与烟曲霉菌分生孢子共培养,分为正常组、1-MT(1m M)组和IFNG(400U/ml)组,采用烟曲霉菌落形成单位(CFU)的计数方法对各组中性粒细胞的吞噬功能进行定量检测。2、采用RT-PCR检测烟曲霉菌菌丝刺激不同时间点的小鼠角膜中IDO、中性粒细胞趋化相关细胞因子及炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12)mRNA的表达。采用RT-PCR检测损伤对照组、1-MT组、感染组、1-MT+感染组的小鼠角膜中中性粒细胞趋化相关细胞因子(CXCL-1、ICAM-1、IL-8、IL-1β)mRNA表达。使用1-MT(1m M)和IFNG(400U/ml)分别预处理小鼠腹腔中性粒细胞2小时,采用RT-PCR检测烟曲霉灭活菌丝刺激8小时后各组中性粒细胞趋化相关细胞因子及炎症因子(IL-1β、CXCL-1、VCAM-1、CCL2、IL-8、IL-6)mRNA的表达变化。3、采用蛋白质免疫印迹法对损伤对照组、1-MT组、感染组、1-MT+感染组的小鼠角膜中JNK蛋白的表达进行检测。结果:1、烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型中角膜感染在第3天最为严重,角膜组织中中性粒细胞相关炎症因子(IL-1β、IL-17、IL-23、TGF-β、Foxp3)在感染后第3天达到高峰。与正常组的小鼠角膜相比,感染组角膜中中性粒细胞募集的数量增加。1-MT+感染组与感染组相比,小鼠角膜病变程度加重,中性粒细胞募集数量增加。与正常组相比,1-MT抑制了小鼠腹腔中性粒细胞对烟曲霉孢子的吞噬作用;2、在烟曲霉菌灭活菌丝刺激小鼠腹腔中性粒细胞16小时后IDO mRNA表达高峰;与感染组相比,1-MT+感染组的小鼠角膜中中性粒细胞趋化因子及炎症因子CXCL-1、ICAM-1、IL-8、IL-1βmRNA表达明显升高;与感染组相比,1-MT+感染组的小鼠腹腔中性粒细胞中中性粒细胞趋化因子及炎症因子CXCL-1、VCAM-1、CCL2、IL-8、IL-1β、IL-6mRNA表达明显升高;3、与感染组相比,1-MT+感染组的小鼠角膜中JNK蛋白表达水平下调。结论:在烟曲霉菌性角膜炎中IDO介导的烟曲霉菌的保护性免疫耐受是通过抑制中性粒细胞的募集和趋化功能、增强中性粒细胞吞噬功能产生的。IDO通过MAPK/JNK途径在烟曲霉菌性角膜炎中发挥免疫耐受作用。
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