【摘 要】
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目的:探讨Rho激酶抑制剂Y27632对视网膜缺血再灌注损伤的保护机制,为青光眼视神经保护治疗提供理论依据。方法:将大鼠随机分为正常对照组、急性缺血再灌注组、生理盐水对照组、Y27632治疗组。制作急性缺血再灌注动物模型;再灌注损伤后24小时和168小时处死各组动物,行HE染色、ADP酶染色检查,光镜下观察大鼠视网膜组织病理学变化及视网膜厚度变化。再灌注损伤后24小时处死各组动物,Westem b
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目的:探讨Rho激酶抑制剂Y27632对视网膜缺血再灌注损伤的保护机制,为青光眼视神经保护治疗提供理论依据。方法:将大鼠随机分为正常对照组、急性缺血再灌注组、生理盐水对照组、Y27632治疗组。制作急性缺血再灌注动物模型;再灌注损伤后24小时和168小时处死各组动物,行HE染色、ADP酶染色检查,光镜下观察大鼠视网膜组织病理学变化及视网膜厚度变化。再灌注损伤后24小时处死各组动物,Westem blowing检测大鼠视网膜Caspase-3蛋白表达量,Real-time PCR检测各组大鼠视网膜Bcl-2 mRNA表达量。采用SPSS17.0统计软件对数据进行处理。视网膜厚度、Bcl-2 mRNA相对表达量以及Caspase-3蛋白表达量均以x±s表示,差异显著性检验采用单因素方差分析,多重数据的两两比较采用LSD检验,以P<0.05作为差异有统计学意义。结果:1、HE染色:正常对照组大鼠视网膜结构清晰,三层细胞结构排列整齐。内界膜较平滑。急性缺血再灌注组于再灌注24小时后视网膜厚度增加,内外丛状层组织疏松,视网膜节细胞、内外核层细胞水肿明显,排列紊乱,视网膜节细胞减少。168小时后,视网膜水肿消退,厚度变薄,呈萎缩状,神经节细胞及内外核层细胞数量减少,在视网膜前和神经纤维层可见毛细血管。2、视网膜厚度测量:再灌注24小时后,缺血再灌注组视网膜厚度较正常对照组视网膜厚度增加,差异有统计学意义（t=2.869,P=0.008）;Y27632治疗组视网膜厚度低于生理盐水对照组视网膜厚度,差异有统计学意义（t=2.327,P=0.032）。再灌注168小时后,缺血再灌注组视网膜厚度低于正常对照组视网膜厚度,差异有统计学意义（t=3.174,P=0.003）;Y27632治疗组视网膜厚度较生理盐水对照组视网膜厚度增加,差异有统计学意义（t=1.158,P=0.035）。3、ADP酶染色:正常对照组大鼠视网膜血管自视乳头发出,向四周呈放射状均匀分布,毛细血管网结构清晰。再灌注24小时后,急性缺血再灌注组视网膜血管管径变细,走行较僵直,分支减少,视乳头周围及中周部视网膜可见大片无灌注区,无灌注区周围可见新生血管芽渐成网状。Y27632治疗组可见视乳头周围及中周部视网膜局部有无灌注区形成,无灌注区周围可见新生血管。后极部4PD无灌注区面积明显少于缺血再灌注组。4、Western Blot检测Caspase-3蛋白表达:缺血再灌注损伤组与正常组相比蛋白表达增高,差异有统计学意义（t=3.306,P=0.002）;Y27632治疗组与生理盐水对照组相比表达降低,差异有统计学意义（t=2.364,P=0.025）。5、RT-PCR检测Bcl-2mRNA的表达:缺血再灌注24小时后大鼠视网膜Bcl-2 mRNA表达量较正常组增加,差异有统计学意义（t=2.953,P=0.005）;Y27632治疗组与生理盐水对照组相比,视网膜Bcl-2 mRNA的表达增加,差异有统计学意义（t=2.249,P=0.03）。结论:1、急性高眼压可引起视网膜缺血再灌注损伤,导致视网膜的早期水肿及晚期萎缩,同时引起视网膜神经节细胞凋亡。2、视网膜缺血再灌注损伤可引起视网膜神经纤维层新生血管生成。3、Y27632玻璃体腔注射可以减轻视网膜缺血再灌注早期的视网膜水肿,减少视网膜神经节细胞的凋亡,减轻再灌注晚期的视网膜萎缩,具有视神经保护作用。4、Y27632玻璃体腔注射可以减轻视网膜缺血再灌注损伤后的视网膜新生血管生成。5、Y27632玻璃体腔注射可以降低视网膜缺血再灌注损伤诱导的Caspase-3蛋白的表达。6、Y27632玻璃体腔注射可以增强视网膜缺血再灌注损伤Bcl-2 mRNA的表达。
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