干扰素(Interferon,IFN)具有广泛的生物学活性，能抑制细胞的DNA合成，减慢细胞的有丝分裂速度；这种抑制作用有明显的选择性，对肿瘤细胞的作用比对正常细胞的作用强500～1000倍。它还可诱导NK、CTL等杀伤细胞，并协同IL-2增强LAK活性；诱导肿瘤细胞表达MHCⅠ类抗原，增加对杀伤细胞的敏感性；抑制肿瘤新生血管的形成。大量临床实践证明，IFN的治疗一般需要较大剂量，疗效呈剂量依赖性，毒副作用也随剂量加大而相应增加，最常见的不良反应为流感样症状，如发热、寒颤、乏力等，多次给药后病人多可耐受，剂量较高时还可出现消化道反应、骨髓抑制等症状。研究结果还显示，注射入病人体内的IFN进入肿瘤部位的极少，因而，对治疗效果有较大的负面影响。 导向治疗可将药物特异性地富集在病理部位，提高药物局部治疗效果，降低药物对其他组织器官的毒副作用。一般常用的导向药物载体多为单克隆抗体或基因工程抗体。但抗体类导向药物载体具有制备工艺复杂、易引起免疫反应、组织穿透能力差等缺陷，使其应用受到了很大的限制。近年来，应用噬菌体随机多肽库技术筛选出了多种可与靶分子特异性结合的多肽，为导向药物的研制提供了一类新的载体分子。通过噬菌体呈现技术鉴定出了可以和新生血管特异性结合的多肽NGR常四军医大学祠可士学位论文 (C NGRCvSGCAGRC)，该多肤可介导化学药物、蛋白质等在肿瘤组织富集，在肿瘤治疗方面具有良好的应用前景。 在本研究中，合成了编码NGR(CNGRCvSGCAGRC)多肤的寡核普酸片段，将IFN a Zb基因和编码NGR多肤的寡核昔酸片段融合克隆进克隆载体。经DNA测序正确后，将IFN Q Zb一NGR融合基因克隆进表达载体。再将表达载体转入大肠杆菌DH5a，建立菌种库，并对菌种各项指标进行检测。结果表明，得到了能够稳定表达融合蛋白的工程菌株。应用发酵罐对工程菌进行高密度培养，每升培养基可获取湿菌体45克。采用化学裂解法处理菌体，再经过离子交换和亲和层析色谱进行纯化，得到了IFN。2b一GR纯品，其比活性可达lxl09U/l ng，纯度达到95%以上。应用ELISA和免疫组织化学技术检测了荷瘤小鼠肿瘤和其它组织中IFNQZb一NGR的分布情况。结果显示，IFN a Zb一GR在肿瘤组织中的剂量占全身给药量的74.%%，其浓度至少为同等条件下IFN QZb在肿瘤组织中剂量的3.35倍。免疫组织化学检测发现，在肿瘤组织中观察不到IFNa2b的分布，而IFN Q Zb一NGR在肿瘤组织血管内壁表面呈强阳性反应，证明了IFN Q Zb一GR主要分布于肿瘤血管内壁上。