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乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,不仅严重威胁着女性的生活质量和生命健康,而且对整个社会经济、家庭幸福均带来不良影响。美国华盛顿大学研究人员估计2010年全世界乳腺癌新发患者约164万,且乳腺癌的发病有明显的人群和地区分布特点。纵观近30年乳腺癌发病情况,即从1980的发病人数641000例到2010年1643000例,乳腺癌的发病率呈上升趋势,年增长率为3.1%,可以说乳腺癌已逐渐成为女性第一大恶性肿瘤。乳腺癌的发生发展是一个多因素、多步骤和多途径的复杂过程,是环境因素和遗传因素共同作用的结果,不能用己知的单个或多个乳腺癌的危险因素完全解释或准确预测不同国家、不同人群乳腺癌的发生率。乳腺癌一旦发生,早期诊断是提高疗效的关键。因此,深入研究乳腺癌发生机制,寻找敏感性高、特异好的与乳腺癌相关的分子生物标记,是乳腺癌研究的方向之一。微RNA (microRNA)是自1993年以来生命科学领域的重大发现之一,在癌细胞中表达异常,其不仅种类繁多,并且一种microRNA可以针对多个靶基因发挥作用,在肿瘤的发生、发展、诊断、治疗、预后中均有重要的价值,为肿瘤的防治提供了新的思路。近年来研究发现编码microRNA的基因以及microRNA的靶基因结合位点存在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP),可影响microRNA作为癌基因或抑癌基因的功能,使个体间肿瘤易感性存在差异。自2009年开始,不同国家地区的研究人员相继开展了miR-146a、miR-196a2和miR-499的SNPs与乳腺癌易感性的研究,其它的microRNA基因SNP与乳腺癌的研究报道相对较少,即使报道了,由于研究对象的选择存在局限性,只报道部分国家或部分种族的人群,缺乏中国汉族人群的资料,因此我们开展了一项病例对照研究,以中国汉族人群为研究对象,研究miR-27a基因SNP与乳腺癌遗传易感性的关系。microRNA不仅在乳腺瘤的发生中发挥作用,在其诊断中也有重要价值。在2008年,首次在血液中发现含有稳定表达的循环microRNA,但有关血循环microRNA在乳腺癌发病和诊断中的研究报道甚少,因此我们应用定量PCR (polymerase chain reaction)检测了乳腺癌患者和对照组血清中miR-182的水平,判断血清中miR-182在乳腺癌诊断中的作用,为乳腺癌的诊断提供科学依据。现有发表的关于microRNA基因SNP与乳腺癌的发病风险研究,由于存在随机误差或研究对象、研究设计等方面不同,即使针对相同microRNA基因SNP与乳腺癌的研究结果也不全相同,而且单个研究的样本数量相对较小,抽样误差相对较大。我们按照meta分析的要求及过程,开展了miR-146a、miR-196a2和miR-499的SNPs与乳腺癌易感性的meta分析,增大样本含量,提高检验效能,得到更加真实可靠的结论,有助于从基因水平更好地认识乳腺癌的易感性,开展乳腺癌的预防工作。本论文研究目的是探讨microRNA在乳腺癌发生和诊断中的作用,为乳腺癌的预防控制提供科学依据。研究共分三部分,即第一部分：miR-27a单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的病例对照研究；第二部分：循环血清miR-182在乳腺癌诊断中的作用；第三部分：miR-146a、miR-196a2和miR-499单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的meta分析。第一部分：miR-27a单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的病例对照研究[目的]以中国汉族人群为研究对象,检测乳腺癌患者和对照人群miR-27a基因SNP(rs11671784)的分布情况,探讨其与乳腺癌易感性的关系。[方法]采用病例对照研究方法,对中国山东地区112名乳腺癌患者和225名健康对照收集基本信息,采集外周血2ml,提取DNA, PCR扩增,限制性内切酶BamHI对PCR产物进行酶切,检测(?)miR-27a(rs11671784)基因型,非条件logistic回归分析得出调整前后的比值比(odds ratio, OR)和其95%可信区间(95%CI)。[结果]乳腺癌组和对照组的miR-27a基因型差异有统计学意义,GA基因型与GG基因型相比,经调整年龄、BMI、绝经状态等因素后其调整的aOR=0.32,95%CI(0.12,0.85), P=0.02,可以认为携带GA基因型是乳腺癌的保护因素。[结论]miR-27a(rs11671784)在乳腺癌的发生中起作用,可作为乳腺癌新的分子生物标志,探讨乳腺癌遗传易感性的可能机制。第二部分：循环miR-182在乳腺癌诊断中的作用[目的]为寻找乳腺癌诊断新的分子生物标记物,研究血清miR-182在乳腺癌诊断中的作用。[方法]应用定量PCR检测了46名乳腺癌患者和58名对照血清中miR-182的水平。[结果]乳腺癌患者血清中的miR-182的水平高于健康对照组(P<0.01)。雌激素受体ER阳性患者血清中miR-182水平明显低于ER阴性患者,孕激素受体PR阳性患者血清中miR-182水平也低于PR阴性患者。[结论]血清miR-182在乳腺癌诊断中具有重要价值,为乳腺癌的诊断提供了一种新的分子标记物。第三部分：miR-146a、miR-196a2和miR-499单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的meta分析[目的]关于microRNA基因SNP与乳腺癌的发病风险研究由于研究对象、研究设计等方面不同,即使针对相同microRNA基因SNP与乳腺癌的研究结果也不全相同,而且单个研究的样本数量相对较小,抽样误差相对较大。按照meta分析的要求及过程,进行miR-146a、miR-196a2和miR-499的SNPs与乳腺癌易感性的meta分析,增大样本含量,提高检验效能,得到更加真实可靠的结论,有助于从基因水平更好地认识乳腺癌的易感性,开展乳腺癌的预防工作。[方法]通过计算机检索PubMed和Embase等数据库,并辅以追踪参考文献的方法,收集2009年1月至2013年1月公开发表的相关病例对照研究,按照meta分析的基本步骤进行分析。[结果]miR-146a/rs2910164与乳腺癌易感性的文献经筛选评价后共6项研究,累计4225例乳腺癌患者和4469例对照者,各基因型相比均无统计学意义。miR-196a2/rs11614913与乳腺癌易感性的文献经筛选评价后共8项研究,累计有4110例乳腺癌患者和5100例对照者,剔除2项不符合HWE研究后,TT+CT基因型与CC基因型相比较,OR=0.906,95%CI(0.825,0.995),P=0.039,有统计学意义,其它各基因型相比均无统计学意义。miR-499/rs3746444与乳腺癌易感性的文献经筛选评价后共3项研究,累计有2588例乳腺癌患者和3260例对照者,各基因型相比均无统计学意义。[结论]有关microRNA基因SNP与乳腺癌易感性的原始研究相对较少,现有研究表明miR-196a2/rs11614913在乳腺癌发生和诊断中具有重要意义,为乳腺癌的预防提供了科学资料。本研究的创新点1、以中国汉族人群为研究对象,检测了乳腺癌患者和对照人群miR-27a基因SNP(rs11671784)的分布情况,研究发现与GG基因型相比,携带GA基因型是乳腺癌的保护因素,为乳腺癌的预防提供了科学依据。2、以中国汉族人群为研究对象,检测了乳腺癌患者和对照人群血清miR-182的水平,研究发现乳腺癌患者血清中的miR-182的水平明显高于对照组,为乳腺癌的诊断提供了一种新的分子生物标记物。3、按照meta分析的过程和要求,进行了miR-146a、miR-196a2和miR-499单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的meta分析,结果发现miR-196a2/rs11614913在乳腺癌发生中具有重要意义,为乳腺癌的预防控制提供了科学资料。