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目的：人β-防御素是近年来发现的广泛表达于机体上皮及粘膜组织的抗菌肽家族成员之一,具有广谱的抗菌活性,是机体防御病原微生物入侵的重要介质。本研究旨在利用基因工程技术构建人p-防御素-2(human beta-defensin-2, hBD-2)基因真核表达载体,通过脂质体法转染人膀胱上皮细胞株及大鼠膀胱内原位转染后,评价基因重组hBD-2在体内、外转染细胞中的表达及抗菌活性；探讨应用该载体获得重组hBD-2在泌尿道表达的可行性；同时以泌尿系感染大鼠为动物模型对重组hBD-2在泌尿系感染中的保护作用进行研究。以期为难治性泌尿系感染防治提供新手段；为解决细菌耐药等问题提供新思路。方法：从人体宫颈癌组织中克隆获得人p-防御素-2基因,通过基因工程技术构建其真核表达载体pCAGG-hBD-2,经PCR、,酶切鉴定及基因测序分析序列正确。采用脂质体法体外转染人膀胱上皮细胞株及逆行保留灌注体内转染大鼠膀胱上皮细胞后,采用ELISA法定量检测细胞上清液及大鼠尿液中重组hBD-2的表达,RT-PCR及Western blotting检测细胞中hBD-2基因在mRNA及蛋白质水平的表达。菌落计数法检测重组hBD-2的体外抗菌活性。建立尿路致病性大肠杆菌泌尿系感染动物模型,经膀胱灌注给予携带hBD2基因载体的脂质体,进行重组hBD2对泌尿系感染的保护作用研究,包括细菌清除率、组织病理变化、炎症评分。结果：1.通过酶切、PCR及DNA序列测定证明,重组真核表达载体pCAGG-hBD-2插入hBD-2 cDNA片段无误,连接方向正确,真核表达载体构建成功。2.以pCAGG-hBD-2转染的人膀胱上皮细胞株T24细胞和大鼠膀胱组织的总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,可扩增出大小为31lbp的特异性条带；Western blotting检测亦可见阳性条带；而对照载体转染组未见阳性表达结果。3. ELISA结果表明pCAGG-hBD-2转染的T24细胞上清液及大鼠尿液中基因重组hBD2的浓度分别为36.5±3.2 ng/106cells和4.77±1.4ng/mL;而对应空载体转染组标本中未检测到hBD2表达。4.组织免疫荧光检测显示,通过膀胱保留灌注pCAGG-hBD-2/脂质体复合物2小时可成功原位转染大鼠膀胱上皮,转基因hBD-2主要表达于膀胱粘膜上皮层。5.菌落计数法检测结果显示,转染pCAGG-hBD-2的T24细胞上清液对尿路致病性大肠杆菌UTI89和克雷白杆菌TOP52有明显的杀菌作用。6.hBD-2基因转染的UTI大鼠在转染后24、48和72小时其尿液、膀胱及肾脏组织中的活菌计数均显著低于对照组(P<0.01)；体内表达的重组hBD-2可显著减轻UTI大鼠的粘膜损伤、间质水肿及中性粒细胞侵润。结论：成功构建的hBD-2真核表达载体pCAGG-hBD-2经脂质体介导体内、外转染膀胱上皮细胞后均能高效表达具有抗菌活性的hBD-2；同时,体内过表达的基因重组hBD-2可调节膀胱损伤早期炎症反应,改善泌尿系感染的预后。预示了通过膀胱灌注脂质体介导的hBD-2基因转染是一种最有前景的泌尿系感染防御素基因治疗模式。