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目的:研究肺动脉平滑肌中NAADP/TPCs/Ca2+信号通路在慢性低氧状态下的表达改变,及这种改变与肺动脉平滑肌增殖的关系,从而为研究低氧性肺血管重塑(HPSR)提供新的理论依据。方法:1.建立慢性低氧肺动脉高压大鼠模型,用右心导管法测量大鼠平均肺动脉压(m PAP),称量法计算Fulton指数(RV/LV+S),并进行HPSR指标观察;用Western-blot、荧光实时定量PCR、免疫组织化学及ELISA等方法检测肺组织中NAADP、TPC1/2的m RNA和蛋白表达情况,并分析其之间的相关性。2.分别将带有沉默TPC1/2 si RNA基因的慢病毒和阴性对照慢病毒注射于常氧和低氧组,用右心导管法测量大鼠平均肺动脉压(m PAP),称量法计算Fulton指数(RV/LV+S),并进行HPSR指标观察;同时通过Western-blot、荧光实时定量PCR、免疫组织化学检测肺组织中TPC1/2的m RNA和蛋白表达情况。3.实时PCR和Western-blot检测沉默TPC1/2组和阴性对照组中Ca2+浓度及信号传导相关因子Ca MKII、Calcineurin中m RNA和蛋白表达情况。结果:1.ELISA、Western-blot检测结果表明,与常氧组相比,低氧组NAADP浓度、TPC1和TPC2中m RNA和蛋白表达均显著上调(P<0.05)。2.通过Spearman等级相关分析,我们观察到NAADP含量分别与TPC1和TPC2表达呈正相关(P<0.05);TPC1的表达与TPC2表达也呈正相关(P<0.05)。3.沉默TPC1/2后显著下调TPC1/2中m RNA和蛋白表达(P<0.05);在慢性低氧环境中,沉默TPC1/2组比阴性对照组具有更好的肺血管形态学(P<0.05)。4.低氧组较常氧组平均肺动脉压、Fulton指数(RV/LV+S)显著上调;而低氧+沉默TPC1/2组较低氧+阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。5.在肺动脉平滑肌细胞中,沉默TPC1/2组较阴性对照组对NAADP-AM活化的Ca2+以及信号传导相关因子Ca MKII、Calcineurin中m RNA和蛋白表达均有显著抑制作用,沉默TPC1引起的抑制作用更强(P<0.05)。结论:1.低氧能上调大鼠肺组织NAADP、TPC1/2的表达,且NAADP含量与TPC1和TPC2表达均呈正相关,二者均参与低氧性肺动脉高压发病过程。2.干预TPC1/2均能改善NAADP诱导的肺动脉平滑肌细胞钙离子释放和增殖,其中TPC1在该过程中起主导作用。