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【实验目的】 通过观察细胞增殖水平，筛选藤黄属植物山竹提取物中对人视网膜母细胞瘤WERI-RB-1细胞株细胞具有选择性活性的单体，并研究藤黄属植物山竹提取物活性单体对人视网膜母细胞瘤WERI-RB-1细胞株细胞增殖及凋亡的影响，观察该活性单体不同浓度条件下对WERI-RB-1细胞株细胞内Erk1/2，p-Erk1/2，BAX， BCL-2蛋白的表达水平的影响，从细胞水平评估该单体药物靶向治疗RB的可能性。 【实验方法】 （1）培养人视网膜母细胞瘤WERI-RB-1细胞株，观察活细胞的生长状况，在细胞处于对数生长期时进行实验。 （2）实验分组：本实验分为实验组及对照组，实验组又按照单体不同浓度分为A、B、C、D、E组，各实验组中单体浓度梯次倍比递增，依次为 0.625ug/ml，1.250ug/ml，2.500ug/ml，5ug/ml，10ug/ml；对照组不加任何药物处理，仅加 RPMI-1640 培养液进行培养。 （3）研究方法：采用CCK-8（Cell Counting Kit-8）试剂盒处理各组细胞，检测细胞的增殖状态，初步筛选出对人视网膜母细胞瘤WERI-RB-1细胞株活性相对较高的单体；进一步检测活性单体对人视网膜母细胞瘤WERI-RB-1细胞株细胞的增殖抑制活性；应用流式细胞学技术对各组中细胞的凋亡状态进行分析；Western Blot法检测各组中Erk1/2，p-Erk1/2，BAX，BCL-2蛋白的表达水平。 【实验结果】 （1）五种山竹提取单体分别处理WERI-RB-1细胞株细胞后，通过检测各组细胞的增殖状态，筛选出3号单体为针对WERI-RB-1细胞株细胞具有选择性活性的单体； （2）不同浓度3号单体处理细胞后，实验组各组细胞的增殖均受到不同程度抑制，随着单体浓度递增，实验组（A、B、C、D、E）的细胞增殖抑制率逐渐增高，依次为：2.565±0.901%，5.801±1.189%，14.930±1.774%，25.945±3.118%， 55.805±4.154%，与对照组相比，A组差异无统计学意义（P=0.3942＞0.05），其余各实验组均有显著差异，有统计学意义（P＜0.05）。 （3）流式细胞术结果显示：随着单体浓度的递增，各实验组（A、B、C、D、E）细胞总凋亡率表现出逐渐增高的趋势，凋亡率依次为：5.827±1.167%，8.973±1.532%，9.897±1.521%， 11.293±1.786%，18.820±2.526%，与空白对照组（总凋亡率为4.710±1.268%）相比，实验组A细胞总凋亡率的升高无统计学意义（P=0.8810＞0.05），其余各实验组均有显著的统计学意义（P＜0.05）。 （4）WB 结果显示：随着 3 号单体浓度不断增加，实验组A、B、C细胞内Erk1的表达水平（0.653±0.00831，0.639±0.00551， 0.657±0.00850）变化与对照组（0.640±0.00819）相比差异无统计学意义（P＞0.05），实验组D、E细胞内的Erk1的表达水平（0.689±0.00258，0.695±0.00652）与对照组相比显著上升，差异有统计学意义（P＜0.0001）；实验组A、B细胞内Erk2的表达水平（1.008±0.0188，0.977±0.0237）变化与对照组（1.003±0.00504）相比差异无统计学意义（P ＞0.05），实验组 C、D、E 细胞内的 Erk2 的表达水平（1.108±0.0126，1.211±0.00363，1.205±0.00680）与对照组相比显著上升，差异有统计学意义（P＜0.0001）；实验组C、D、E细胞内p-Erk1/Erk1（0.185±0.00101， 0.138±0.000349，0.102±0.00107）的变化与对照组（0.204±0.00320）相比差异有统计学意义（P＜0.0001），实验组C、D、E细胞内p-Erk2/Erk2（0.296±0.00134， 0.240±0.000621，0.181±0.000817）的变化与对照组相（0.331±0.00497）比有统计学意义（P＜0.05），其余实验组（A、B）细胞内p-Erk1/Erk1（0.206±0.00148， 0.204±0.00138）、p-Erk2/Erk2（0.336±0.00702，0.339±0.00693）与对照组相比均无统计学意义（P ＞0.05）；实验组A、B、C、D、E细胞内BAX/BCL-2的表达水平（1.055±0.0764，1.050±0.0126，1.868±0.112，3.120±0.170，3.637±0.232）变化与对照组（0.991±0.0545）相比差异具有显著的统计学意义（P＜0.0001）。 【结论】 藤黄属山竹植物3号单体提取物能显著抑制WERI-RB-1细胞的体外生长，同时在单体浓度达到2.5μg/ml后可通过抑制MAPK/Erk通路的激活以及调节部分凋亡相关蛋白的水平（上调 BAX 水平，下调 BCL-2 的水平），抑制 WERI-RB-1细胞的增殖，并诱导WERI-RB-1细胞的凋亡。