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目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白Pgp3诱导He La细胞产生IL-8的机制,为进一步认识Ct的致病机制提供有效实验依据。方法:大规模诱导表达GST-Pgp3融合蛋白,采用Glutathione Sepharose 4B树脂纯化,Pre Scission Protease切除GST标签后去内毒素处理而获得纯化的Pgp3蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳和western blot鉴定;选择浓度为0μg/m L、6μg/m L、12μg/m L、24μg/m L的Pgp3蛋白分别刺激He La细胞0 h、4 h、12 h、24 h,Real-time PCR检测IL-8和RIP2的m RNA转录水平,Real-time PCR和western blot分别检测NOD1的转录水平和表达水平;选择优化的Pgp3蛋白浓度和时间预处理He La细胞,western blot分别验证在0min、15min、30min、60 min时ERK和p38磷酸化情况;分别用NOD1抑制剂(ML130)、RIP2抑制剂(GSK583)、ERK抑制剂(PD98059)以及p38抑制剂(LY2228820)预处理He La细胞,再以最佳蛋白刺激浓度和时间刺激He La细胞,Western blot、Real-time PCR和ELISA验证NOD1是否依赖于ERK和p38途径介导IL-8的产生。结果:1.将重组菌p GEX-pgp3/XL1-blue以30℃,4 h,180 rpm,加入0.2 mmol/L的IPTG的诱导条件表达出分子量约为54 k D的GST-Pgp3融合蛋白,再经Pre Scission Protease切割GST标签后,将获得的蛋白通过western blot进行验证,得到分子量约为28k D的Pgp3蛋白,且纯度可达95%以上;2.Pgp3质粒蛋白能够使He La细胞IL-8的表达水平升高,且最佳刺激浓度和最佳刺激时间分别呈一定的浓度和时间依赖性,即可能的最佳浓度和蛋白刺激时间分别为24μg/ml和24 h;3.Pgp3质粒蛋白刺激He La细胞后NOD1受体的转录水平和蛋白表达水平均升高,Pgp3质粒蛋白分别在浓度为24μg/ml时间为12 h的情况下,NOD1的转录水平和表达水平呈现出最佳状态;4.Pgp3质粒蛋白能调控He La细胞的NOD1受体及其下游分子RIP2的表达,同样Pgp3质粒蛋白处理的两组中,NOD1抑制剂预先作用于He La细胞组比Pgp3蛋白刺激组RIP2 m RNA转录水平降低了26.87%;5.Pgp3质粒蛋白刺激He La细胞可使ERK和p38分别磷酸化,且两者磷酸化的时间分别发生在15 min和30 min;6.Pgp3调控NOD1诱导He La细胞产生IL-8不依赖于活化的ERK和p38途径。分别用NOD1抑制剂(ML130)、RIP2抑制剂(GSK583)、ERK抑制剂(PD98059)以及p38抑制剂(LY2228820)预处理He La细胞,再分别加入Pgp3之后,IL-8的m RNA转录水平和表达水平分别较阴性对照组降低了65.70%、40.87%、31.47%、27.84%和66.02%、34.77%、42.02%、24.58%。结论:1.Pgp3可诱导He La细胞产生IL-8;2.Pgp3可调控NOD1/RIP2诱导He La细胞产生IL-8,此条通路并不依赖于ERK和p38途径。