【摘 要】
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鱼腥草为三白草科植物蕺菜（Houttuynia cordata Thunb.）的新鲜全草或干燥地上部分,又名折耳根;喜生于山坡阴处、路旁及水沟边;主要分布于我国中部、东南及西南各省;其味辛、性寒,具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋等功效;临床上多用于治疗呼吸系统、消化系统和泌尿系统疾病。文献调研表明,鱼腥草含有挥发油、黄酮、生物碱和多糖等多种化学成分,其中生物碱类成分包含马兜铃内酰胺。由于马兜铃内酰
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鱼腥草为三白草科植物蕺菜（Houttuynia cordata Thunb.）的新鲜全草或干燥地上部分,又名折耳根;喜生于山坡阴处、路旁及水沟边;主要分布于我国中部、东南及西南各省;其味辛、性寒,具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋等功效;临床上多用于治疗呼吸系统、消化系统和泌尿系统疾病。文献调研表明,鱼腥草含有挥发油、黄酮、生物碱和多糖等多种化学成分,其中生物碱类成分包含马兜铃内酰胺。由于马兜铃内酰胺和马兜铃酸结构十分相近,而马兜铃酸具有明确的肾毒性和致癌性等作用,因此,鱼腥草中马兜铃内酰胺类成分的安全性备受关注与重视,与此同时,相关研究相对匮乏,亟待阐明。本文应用现代分离技术对鱼腥草生物碱类成分进行了深入而系统的研究。第一部分鱼腥草中生物碱等化学成分的分离与分析。1.从鱼腥草乙醇提取物中分离并鉴定了15个化合物。包括6个生物碱类化合物、7个黄酮类化合物和2个酚酸类化合物。采用多种谱学方法确定其结构分别为:3,5-didecanoyl-4-nonyl-1,4-dihydropyridine（1）、马兜铃内酰胺AⅡ（2）、马兜铃内酰胺FⅠ（3）、cis-N-（4-hydroxystyryl）benzamide（4）、马兜铃内酰胺BⅡ（5）、头花千金藤二酮B（6）、异槲皮苷（7）、槲皮苷（8）、金丝桃苷（9）、槲皮素（10）、阿福豆苷（11）、牡荆素（12）、山柰酚（13）、原儿茶酸（14）和绿原酸（15）。2.采用UPLC-Q-TOF-MS技术分析鱼腥草中微量成分,初步鉴定出13个生物碱类成分。综合色谱分离和高分辨质谱鉴定结果,从鱼腥草中共鉴定出15个生物碱类成分,其中分离得到6个生物碱,根据质谱数据推断出9个生物碱,O-去甲荷叶碱和N-去甲荷叶碱通过对照品验证。第二部分鱼腥草安全性研究。1.鱼腥草提取物及单体化合物的肝肾细胞毒性研究;水煎煮、乙醇提取物及其不同萃取部位（二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位）的肝肾细胞毒性筛选。结果表明,鱼腥草二氯甲烷部位对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E、人正常肝细胞L02、大鼠肝细胞BRL-3A和小鼠正常肝细胞AML-12具有明显细胞毒性;从鱼腥草二氯甲烷部位分离得到的单体化合物马兜铃内酰胺AⅡ、FⅠ、BⅡ和头花千金藤二酮B对AML-12、L02、BRL-3A细胞株具有一定细胞毒性。2.鱼腥草二氯甲烷部位在测试浓度范围内对野生型斑马鱼胚胎的急性毒性以致畸为主,具有剂量效应关系。致畸作用主要涉及斑马鱼胚胎躯干、神经系统、心血管和内脏器官的发育。高浓度（0.1mg/m L）的鱼腥草二氯甲烷部位对斑马鱼胚胎具有致死作用。第三部分鱼腥草中生物碱及马兜铃酸类成分含量测定。建立了同时测定7个生物碱（O-去甲荷叶碱、N-去甲荷叶碱、马兜铃内酰胺AⅡ、马兜铃内酰胺FⅠ、马兜铃内酰胺BⅡ、马兜铃内酰胺Ⅰ和头花千金藤二酮B）和5个马兜铃酸（马兜铃酸Ⅲa、7-羟基马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅳa、马兜铃酸Ⅱ和马兜铃酸Ⅰ）的LC-MS/MS方法,用于测定所收集的鱼腥草样品。未检出以上5个马兜铃酸和马兜铃内酰胺Ⅰ（检出限≤4 pg）,检测出O-去甲荷叶碱、N-去甲荷叶碱、马兜铃内酰胺AⅡ、马兜铃内酰胺FⅠ、马兜铃内酰胺BⅡ和头花千金藤二酮B等6个生物碱。综上所述,通过植物化学分离和高分辨质谱定性研究,在鱼腥草药材中共发现15个生物碱类成分,包括5个马兜铃内酰胺,6个阿朴菲型生物碱和4个其他生物碱。肝肾细胞毒性研究发现,鱼腥草二氯甲烷部位具有明显肝、肾细胞毒性;马兜铃内酰胺AⅡ、马兜铃内酰胺FⅠ、马兜铃内酰胺BⅡ和头花千金藤二酮B对部分肝、肾细胞株具有一定毒性,应引起足够的安全重视。为了保证鱼腥草用药安全,收集市场上鱼腥草样品,建立LC-MS/MS方法,对其中生物碱类成分进行含量测定;同时,比较鱼腥草提取方式对生物碱转移的影响,为鱼腥草安全使用提供参考。
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