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目的:观察臭氧(03)关节腔注射对CIA模型大鼠的干预疗效,并在血清水平探讨臭氧关节腔注射之后,对CIA大鼠血清中参与骨代谢因子RANKL、OPG以及炎性趋化因子MCP-1、RANTES、CXCL10水平的影响,进一步在组织和分子水平探讨臭氧关节腔内注射对CIA大鼠骨破坏通路RANKL/OPG和其重要转接蛋白TRAF6以及CXCL10/CXCR3趋化轴的影响。方法:将40只体重及鼠龄相当的Wistar大鼠分为2组,正常组(8只)和造模组(32只),CII+CFA对造模组2次免疫,建立CIA大鼠模型,造模成功(24只)后随机分为CIA组8只、O3组8只;MTX组8只。O3组双踝关节内注射浓度为40μg/ml的O3各1ml,每周1次,共注射3周。MTX组腹腔注射0.9mg/kg,每周1次,共3周。分别测量双足肿胀度、评估关节炎指数和影像学评分对CIA大鼠疗效评估。用高通量流式多因子检测技术测定各组大鼠血清中子RANKL、OPG、MCP-1、RANTES、CXCL10的水平。应用免疫组化技术检测滑膜组织表达TRAF6和CXCR3水平;应用RT-PCR方法检测淋巴结、滑膜、脾脏组织中RANKL、OPG、TRAF6和CXCL10、CXCR3的m RNA表达水平;两组间比较用t检验或Wilcoxon秩和检验。结果:1.臭氧关节腔注射对CIA大鼠的疗效:40ug/ml的臭氧关节腔注射之后足肿胀度、关节炎指数和影像学评分明显改善,提示臭氧关节腔注射对CIA大鼠有明确的疗效2.对骨破坏系统的影响:1)血清中RANKL、OPG、RANKL/OPG变化:?RANKL和RANKL/OPG:CIA组与正常组相比明显升高(P<0.05),O3组与CIA组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),O3组同MTX组相比水平相当(P>0.05)。?OPG水平:各组间差异无统计学意义(P>0.05)。2)滑膜中TRAF6蛋白表达CIA组滑膜细胞TRAF6蛋白表达强于正常组,MTX组和O3组TRAF6蛋白表达弱于与CIA组;O3组TRAF6蛋白表达弱于MTX组;3)淋巴结、滑膜、脾脏中RANKL/OPG及TRAF6m RNA表达(1)淋巴结和滑膜中:RANKL/OPG比例和TRAF6:CIA组m RNA与正常组相比升高(P<0.05);O3组较CIA组降低,差异有统计学意义(P<0.05);O3组与MTX组差异无统计学意义(P>0.05)。(2)脾脏中:CIA组TRAF6的m RNA表达较正常组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);O3组较CIA组明显降低(P<0.05);O3组与MTX组差异无统计学意义(P>0.05)。RANKL/OPG比例各组间无明显差异(P>0.05)。3.对趋化因子的影响:1)血清中MCP-1、RANTES、CXCL10水平(1)MCP-1、RANTES:CIA组与正常组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),O3组与CIA组差异无统计学意义(P>0.05)。(2)CXCL10:CIA组与正常组相比明显升高(P<0.05),O3组与CIA组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),与MTX组相比水平相当(P>0.05)2)滑膜中CXCR3蛋白表达CIA组滑膜细胞CXCR3蛋白表达强于正常组,MTX组和O3组CXCR3蛋白表达弱于与CIA组;O3组CXCR3蛋白表达弱于MTX组3)淋巴结、滑膜、脾脏中CXCL10、CXCR3m RNA表达(1)滑膜中:CIA组与正常组相比明显升高(P<0.05),O3组较与CIA组明显降低(P<0.05)。O3组与MTX组差异无统计学意义(P>0.05)(2)淋巴结和脾脏中O3组与CIA组无明显差异(P>0.05)结论:1.40ug/ml的臭氧关节腔注射之后可改善CIA大鼠关节症状,阻止骨破坏,疗效显著。2.大鼠造模组中RANKL/OPG系统参与了其骨破坏的发生发展,其作用机制可能为下游信号通路转接蛋白TRAF6上调而致RANKL/OPG比例上升。3.臭氧关节腔治疗对CIA大鼠骨破坏系统的作用,是通过减少下游信号通路转接蛋白TRAF6的表达,纠正RANKL/OPG系统的失衡,减少破骨细胞的形成,减轻CIA大鼠的骨质的破坏。其在关节局部作用效果优于MTX全身治疗;4.在CIA大鼠免疫过程中存在CXCL10/CXCR3趋化轴的紊乱,在CIA大鼠形成过程中其表达水平上调;5.臭氧治疗对CXCL10/CXCR趋化因子轴的影响表现为,能降低的CIA大鼠滑膜中CXCL10、CXCR3m RNA的表达量,其在局部滑膜中抑制CXCL10/CXCR3趋化因子轴的作用,可能是其减轻CIA大鼠关节炎症的作用机制之一。