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禽呼肠孤病毒(avian reovirus, ARV)感染可引起鸡和火鸡的病毒性关节炎、腱鞘炎和免疫抑制,给养禽业造成重大损失。已证实ARV感染能诱导细胞自噬和凋亡,且与病毒的致病作用有关,但如何降低ARV诱导的细胞凋亡有待进一步研究。本研究旨在探索自噬抑制剂CQ及E64d+pepstatinA对ARV诱导细胞凋亡的影响。首先使用MTT法检测两种自噬抑制剂对ARV诱导的细胞生长抑制的影响。结果显示,经两种自噬抑制剂预处理的DF1细胞感染ARV后,病毒诱导的细胞生长抑制率显著降低。进一步经形态学观察发现,两种自噬抑制剂作用后,ARV诱导的DF1细胞融合病变显著减少。最后,使用PI和Annexin V-FITC双染法进行流式细胞术检测,结果显示,经CQ或E64d+pepstatinA处理后,ARV诱导的DFl细胞凋亡率显著降低。Caspase-3的裂解水平高低通常被认为是凋亡发生强弱的标志。本实验采用western blot法检测ARV (GX/2010/1株)感染的DF1细胞caspase-3活性,发现经CQ或E64d+pepstatinA预处理后,ARV诱导的DFl细胞凋亡率显著降低。进一步进行病毒衣壳蛋白σ℃表达检测及病毒滴度测定,发现两种自噬抑制剂均可显著降低病毒复制水平。禽呼肠孤病毒可利用凋亡使感染禽产生病理反应,鉴于两种自噬抑制剂可在细胞水平抑制ARV诱导的细胞凋亡,进一步进行了动物实验。使用CQ或E64d+pepstatinA对11日龄鸡胚预处理后,接种ARV病毒(GX/2010/1株),并设立对照组。收集尿囊液进行病毒滴度测定,发现经两种自噬抑制剂处理后,病毒滴度显著低于单独接毒组。收集组织样品进行蛋白检测,并统计鸡胚死亡率,绘制生存率曲线。结果显示,CQ或E64d+pepstatinA均可显著抑制ARV诱导的鸡胚法氏囊、心脏及肠组织细胞凋亡,进一步降低鸡胚死亡率。本研究证明自噬抑制剂CQ和E64d+pepstatinA在抑制自噬的基础上可显著抑制ARV(GX/2010/1株)诱导的细胞凋亡,降低病毒复制水平；对鸡胚,可显著降低ARV(GX/2010/1株)导致的胚体死亡率。