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目的:Livin是凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)的最新成员,含有一个BIR结构及一个锌指结构,它通过抑制Smac和caspase-3、7、9酶活性而产生抗凋亡作用。Livin在某些肿瘤组织中表达,且其高表达常预示肿瘤病人预后不良。Livin在白血病患者中表达及意义尚无明确结论。Smac (second mitochodria-derived activator of caspase, Smac)是由线粒体释放入胞浆的促凋亡蛋白,通过拮抗IAP对caspase-3,caspase-7,caspase-9的抑制作用而诱导凋亡。叠朊蛋白是一种新发现的朊蛋白样糖蛋白,在成人生殖系统及某些肿瘤组织中表达,PRND为叠朊蛋白的编码基因,临床研究还很局限。本研究旨在检测Livin、Smac及PRND mRNA在白血病中表达并分析其临床意义。方法:应用半定量逆转录-聚合酶链反应(simi-quantify reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测了91例急性白血病患者(50例新近诊断急性白血病患者、10例复发患者和31例持续完全缓解期患者)及17例慢性粒细胞白血病患者的骨髓或外周血单个核细胞Livin、Smac及PRND mRNA表达水平。21名健康人为正常对照组。结果1各组中Livin mRNA表达情况1.1 Livin mRNA在急性白血病中表达情况新近诊断急性白血病(AL)患者组Livin mRNA阳性表达率为84%(42/50),表达水平为0-2.473,平均表达水平为0.485,正常对照组阳性表达率为42.9%(9/21),表达水平0-0.285,平均表达水平为0.073,AL组表达水平明显高于正常对照组(P<0.05)。复发组Livin mRNA阳性表达率为100%(10/10),表达水平0.075-1.256,平均表达水平0.536,高于正常对照组(P<0.05),高于AL组,但与AL组差别无统计学意义(P>0.05)。持续完全缓解组Livin mRNA阳性表达率为51.6%(16/31),表达水平为0-0.782,平均表达水平0.211,低于AL组及复发组(P值均小于0.05),比正常对照组高,但无统计学差异(P>0.05)。急性髓系白血病(AML)患者组Livin mRNA阳性表达率为82.5%(33/40),表达水平为0-2.473,平均表达水平为0.446,急性淋巴细胞白血病(ALL)患者组Livin mRNA阳性表达率为90%(9/10),表达水平0-2.209,平均表达水平0.639,ALL组表达水平高于AML组,但两组间差别无统计学意义(P>0.05),两组表达水平均高于正常对照组(P值均小于0.05)。Livin mRNA在AML组M2、M3、M4、M5、M6各亚型间表达水平有差别,在M4中表达水平相对其他亚型较高,但各亚型间差别无统计学意义(P>0.05)。1.2 Livin mRNA在慢性粒细胞白血病中表达情况慢性粒细胞白血病慢性期(CP)患者组Livin mRNA阳性表达率81.8%(9/11),表达水平0-0.552,平均表达水平0.224,正常对照组阳性表达率为42.9%(9/21),表达水平0-0.285,平均表达水平为0.073,CP组Livin mRNA表达水平高于正常对照(NC)组(P<0.05),加速/急变期(AP和BP)患者组阳性表达率为83.3%(5/6),表达水平为0-0.768,平均水平为0.288,高于正常对照组(NC)组(P<0.05)。AP和BP组Livin mRNA表达水平高于CP组,但差别无统计学意义(P>0.05)。2各组中Smac mRNA表达情况2.1 Smac mRNA在急性白血病中表达情况新近诊断急性白血病患者组Smac mRNA阳性表达率为70%(35/50),表达水平为0-1.564,平均表达水平为0.503;正常对照组阳性表达率为23.8%(5/21),表达水平为0-0.460,平均表达水平为0.056;AL组Smac mRNA表达水平明显高于正常对照组(P<0.05)。复发组Smac mRNA阳性表达率为70%(7/10),表达水平为0-1.378,平均表达水平为0.560,高于正常对照组(P<0.05),但与AL组相比差别无统计学意义(P>0.05)。持续完全缓解组Smac mRNA阳性率为32.3%(10/31),表达水平为0-1.232,平均表达水平0.250,低于AL组(P<0.05),高于正常对照组,但差别无统计学意义(P>0.05)。新近诊断急性白血病患者中AML组Smac mRNA阳性表达率为70%(28/40),表达水平为0-1.564,平均表达水平为0.503;ALL组Smac mRNA阳性率为70%(7/10),表达水平为0-0.996,平均表达水平0.502, AML组表达水平高于ALL组,但差别无统计学意义(P>0.05),两组表达水平均高于正常对照组(P值均小于0.05)。Smac mRNA在AML组M2、M3、M4、M5、M6各亚型间表达水平有差别,在M3中表达水平相对其他亚型较高,但各亚型间差别无统计学意义(P>0.05)。2.2 Smac mRNA在慢性粒细胞白血病中表达情况慢性粒细胞白血病慢性期(CP)患者组Smac mRNA阳性表达率为45.5%(5/11),表达水平为0-0.997,平均水平为0.299,高于正常对照(NC)组(P<0.05)。加速/急变期(AP和BP)患者组Smac mRNA阳性表达率为66.7%(4/6),表达水平为0-1.392,平均水平为0.571,高于NC组(P<0.05) ,与CP组相比,差别无统计学意义(P>0.05)。3各组中PRND mRNA表达情况3.1 PRND mRNA在急性白血病中表达情况新近诊断急性白血病患者组PRND mRNA阳性表达率为88.0%(44/50),表达水平为0-2.306,平均表达水平0.387;正常对照组阳性率为57.1%(12/21),表达水平为0-0.336,平均表达水平为0.070,AL组表达水平高于正常对照组,差别有统计学意义(P<0.05)。复发组PRND mRNA阳性表达率90%(9/10),表达水平为0-1.262,平均表达水平为0.526,高于正常对照组(P<0.05),但与AL组相比差别无统计学意义(P>0.05)。持续完全缓解组PRND mRNA阳性表达率77.4%(24/31),表达水平0-1.213,平均表达水平为0.341,高于正常对照组(P<0.05),低于AL组,但与AL组差别无统计学意义(P>0.05)。新近诊断急性白血病患者中AML组阳性PRND mRNA表达率87.5%(35/40),表达水平0-2.306,平均表达水平为0.356,ALL组阳性表达率90%(9/10),表达水平0-0.925,平均表达水平为0.512,ALL组PRND mRNA表达水平高于AML组,但差别无统计学意义(P>0.05),AML组和ALL组表达水平均明显高于正常对照组(P值均小于0.05)。PRND mRNA在AML组M2、M3、M4、M5、M6各亚型间表达水平有差别,在M2中表达水平相对其他亚型较高,但各亚型间差别无统计学意义(P>0.05)。3.2 PRND mRNA在慢性白血病中表达情况慢性粒细胞白血病慢性期(CP)组PRND mRNA阳性表达率90.9%(10/11),表达水平0-1.033,平均表达水平0.276;加速/急变期患者组阳性率100%(6/6),表达水平0.084-1.445,平均表达水平0.352,两组表达水平均高于NC组,差别有统计学意义(P值均小于0.05),加速/急变期表达水平高于慢性期,但差别无统计学意义(P>0.05)。4急性白血病(AL)患者Livin、Smac及PRND mRNA表达情况与临床疗效的关系50例新近诊断AL患者中44例可进行疗效评估(1例早期死亡,5例未治疗)。37例Livin mRNA阳性表达患者中17例获完全缓解,完全缓解率45.95%(17/37),7例Livin mRNA阴性表达患者均获完全缓解,完全缓解率100.00%(7/7),Livin阴性(Livin-)患者组缓解率高于Livin阳性(Livin+)患者组,进行校正的卡方检验分析,两组缓解率差别有统计学意义(χ2=4.928,P=0.026<0.05)。32例Smac mRNA阳性(Smac+)患者组14例完全缓解,缓解率为43.75%(14/32),12例Smac mRNA阴性(Smac-)患者组10例完全缓解,缓解率83.33%(10/12),Smac-患者组缓解率明显高于Smac+患者组的缓解率,经普通卡方检验分析,两组缓解率差别有统计学意义(χ2=5.515 ,P=0.019<0.05)。32例Livin+Smac+患者14例完全缓解,缓解率43.75%(14/32),明显低于Livin-Smac-患者缓解率100.00%(7/7),(Fisher’s确切概率法,P=0.008<0.01),5例Livin+Smac-患者中3例完全缓解,缓解率60%(3/5),与Livin+Smac+组及Livin-Smac-组缓解率差别均无统计学意义(Fisher’s确切概率法,P值均大于0.05)。40例PRND阳性(PRND+)患者中20例完全缓解,缓解率50.00%(20/40),PRND阴性表达(PRND-)患者组完全缓解率100.00%(4/4),高于PRND+组患者缓解率,但经校正的卡方检验分析,尚不能认为两组缓解率有差别(χ2=1.927,P=0.165>0.05)。10例复发组病人仅2例经联合化疗后获完全缓解。其余8例(5例Livin+Smac+PRND+,2例Livin+Smac-PRND+,1例Livin+Smac+PRND-)均未获完全缓解。5相关分析表明在新近诊断白血病患者组Livin mRNA表达水平与Smac mRNA表达水平呈正相关( r=0.545 ,P=0.0001<0.05)。结论1新近诊断急性白血病患者Livin mRNA表达水平明显高于正常对照组,复发组表达水平明显高于正常对照组,但与新近诊断组无显著差别。Livin mRNA阳性表达的急性白血病患者完全缓解率低于Livin mRNA阴性表达的急性白血病患者,提示Livin参与急性白血病的发生与发展,Livin mRNA高表达是急性白血病预后不良指标。2新近诊断急性白血病患者促凋亡蛋白Smac表达水平也明显高于正常对照组, Smac mRNA高表达患者Livin表达水平也较高,提示机体细胞癌变时Smac以拮抗Livin的作用来实现其促凋亡作用。因此,Livin表达水平增高的同时Smac也相应高表达。3新近诊断急性白血病组、持续完全缓解组及复发组患者PRND表达水平均明显高于正常对照组,提示PRND可能参与急性白血病的发生,但机制有待进一步研究。4在新近诊断白血病中Livin mRNA表达水平与Smac mRNA呈正相关。5慢性粒细胞白血病慢性期、加速/急变期患者Livin、Smac及PRND表达水平均高于正常对照组(P值均小于0.05),且加速/急变期表达水平高于慢性期,但差别无统计学意义(P>0.05)。