根据CA Cancer J Clin的文章统计,2018年全球临床癌症的发病率中,乳腺癌居于女性恶性肿瘤发病率首位,在全球癌症发病率中也仅次于肺癌,显然乳腺癌是危害女性健康的第一大恶性肿瘤,其中Her2阳性转移性乳腺癌(metastatic breast cancer,MBC)在晚期乳腺癌占比中达到25%。人表皮生长因子受体 2(human epidermal growth factor receptor 2,Her2/ErbB2)是一种具有酪氨酸酶活性的跨膜蛋白,Her2的过表达往往与许多上皮细胞癌症的恶化密切相关。因此,将Her2作为靶位点治疗乳腺癌成为肿瘤治疗领域的研究热点。目前靶向Her2抗体药物主要有单克隆抗体、双特异性抗体、抗体偶联药物等。美国FDA于1998年批准了第一个用于Her2阳性转移性乳腺癌(metastatic breast cancer,MBC)临床治疗的单克隆抗体药物曲妥珠单抗(Herceptin(?))上市。传统单抗一般选择以具有天然活性蛋白的哺乳动物细胞为表达载体,以保证抗体蛋白的正确修饰和生物学活性。本研究选择以转基因山羊乳腺生物反应器为抗体表达方式,构建Anti-Her2乳腺特异性表达载体pDBC-Her2:含有两个以山羊β-casein为启动子和以牛BGH-PA为终止子的表达框。将Her2抗体的轻链与重链分别连入两个表达框中,该表达载体可通过Cre/loxp重组酶系统将外源目的基因定位整合入人溶菌酶转基因山羊细胞内。转染原代山羊乳腺上皮细胞后通过RT-PCR和Western Blot检测其细胞水平的cDNA/蛋白的表达,完成Anti-Her2乳腺特异性表达载体pDBC-Her2的构建。将构建完成的pDBC-Her2质粒与pBS185质粒共转染人溶菌酶山羊成纤维细胞,利用嘌呤霉素加压筛选获得阳性克隆,通过PCR和测序的方式鉴定其目的基因是否定位整合,筛选获得定位整合的阳性细胞株,同时也是制备转基因山羊的体细胞核移植供体。选择30头2岁龄的健康母关中奶山羊,其中20头为供体,10头为受体,控制同步发情,经过超数排卵和手术取卵后共获得卵母细胞177个,融合后获得重构胚92枚,通过手术移植入10头受体母羊体内。在移植35天后进行B超检查,共检查到2头母羊出现孕囊,怀孕率20%(2/10)。剖腹取出40日龄的羊胎儿,通过PCR和测序方法鉴定,胎儿的基因成功定位整合Her2抗体基因,该羊为pDBC-Her2转基因羊,为后续该转基因羊的扩繁埋下基础。