【摘 要】
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传染性法氏囊病(Infectious bursal disease, IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus, IBDV)引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染病,对世界养禽业危害
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传染性法氏囊病(Infectious bursal disease, IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus, IBDV)引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染病,对世界养禽业危害极大,接种疫苗是预防该病最有效的途径。当前通用的活疫苗有毒力返强的风险,而核酸疫苗则是将编码某种抗原蛋白的外源基因直接导入到动物体内,表达抗原蛋白,并持续诱导宿主产生对该抗原蛋白免疫应答,因而更安全并得到了广泛的研究。VP2蛋白是IBDV的主要结构蛋白又含有病毒的主要的抗原保护性位点,是理想的抗原蛋白,可作为DNA疫苗的首选基因。本研究参照IBDV(HuBei株)序列,使用PRIMER 5.0软件设计并合成引物,并在引物两端两个设计了酶切位点(NheⅠ/HindⅢ),通过聚合酶链反应(PCR)扩增并克隆了IBDV(HuBei株)的VP2基因。然后将VP2插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,置于高效CMV启动子的调控之下,构建成DNA疫苗重组表达质粒pc-VP2,并成功转染HEK-293细胞,在转染48小时后,进行间接免疫荧光试验,筛选出阳性重组表达的质粒。利用免疫重组质粒pc-VP2及化学佐剂磷酸钙配合分组免疫接种14日龄非免疫肉鸡70只,随机分为7组,每组10只,自由采食饮水。所有试验鸡分别于首免后7,14,21,28天翅下静脉采血,分离血清,ELISA法检测血清抗体,并同时采集抗凝血,用于检测外周血淋巴细胞增殖情况。结果显示：含有VP2基因免疫质粒DNA与化学佐剂共同免疫组的血清ELISA抗体水平显著高于空白组及空载体组(p<0.05),与其它各组差异不显著,但略高于其它各组；各质粒免疫组淋巴细胞增殖活性均高于空白对照组,G组(商品疫苗)的淋巴细胞在免疫后7天得到了有效的增殖,与其他各组差异显著(P<0.05)。攻毒试验结果表明：质粒免疫组E组和F组与商品疫苗组保护率最高,达到70%,与对照组保护率(20%)差异极显著(P<0.01)。所有试验结果表明,本研究构建的pc-VP2质粒DNA疫苗为IBD的预防提供了新的思路。
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