维生素D3是人和家畜、家禽生长、繁育、维持生命和保持健康的必不可少的脂溶性维生素。随着人口的日益老龄化和畜牧业的快速发展,社会对维生素D3的需求会越来越大。目前,维生素D3的传统生产工艺一般都是以胆固醇为原料经过酯化、溴化、消除、水解以及紫外光照等流程,也有将溴化工艺改成氧化工艺再通过脱氧、水解以及紫外光照等流程制备得到维生素D3。维生素D3合成反应复杂,副产物较多,因此提纯是制备维生素D3必不可少的一个环节。维生素D3在生产过程产生的杂质主要包括反式维生素D3,7-去氢胆固醇、速甾醇、异速甾醇和亮甾醇,它们均为异构体。根据欧州药典European Pharmacopoeia 8.0规定,维生素D3产品中D3含量要求大于97%,反式维生素D3,7-去氢胆固醇、速甾醇、异速甾醇和亮甾醇杂质含量应分别小于0.1%,杂质总含量小于1%。因此在维生素D3的生产过程中同时监测产品中维生素D3和相关杂质的含量非常重要。欧州药典规定使用正相色谱分离,265 nm紫外检测,外标法定量测定维生素D3的含量;反式维生素D3,7-去氢胆固醇、速甾醇(T3)、异速甾醇和亮甾醇(L3)杂质含量通过面积归一法定量。虽然上述杂质互为异构体,结构相近,但紫外响应并不相同,因此采用面积归一法并不能对维生素D3产品中相关物质准确定量,而影响维生素D3产品中相关物质准确定量的关键因素是相关杂质无商品化标样。本工作中,我们利用半制备色谱柱制备纯化了维生素D3的相关杂质,并通过高分辨质谱、核磁共振等分析方法进行结构确认,获得了它们在254,265,272,281 nm不同波长下相对维生素D3的校正因子。反式维生素D3在上述四个波长下相对维生素D3的校正因子分别为0.447,0.614,0.729,0.909;L3相对维生素D3的校正因子分别为0.136,0.208,0.269,0.350;T3相对维生素D3的校正因子分别为0.376,0.635,0.894,1.465。根据各杂质相对维生素D3的校正因子对产品中相关物质准确定量。此方法可应用于维生素D3纯化过程监测和产品质量研究。维生素D3是一种重要的营养强化剂,但它对光照和高温不稳定,容易氧化或遇光降解。对食品中营养强化剂维生素D3降解产物进行全面分析,对于了解维生素D3的降解机理并采取相应措施将降解做到最小化具有重要的意义。本工作初步考察了维生素D3在40℃,60℃,80℃,100℃下空气中放置不同时间后的含量变化,并利用反相高效液相谱、凝胶色谱法和液质联用等方法对破坏产物进行了初步研究。