蒺藜叶化学成分及生物活性研究

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蒺藜是蒺藜科蒺藜属植物,其拉丁学名为Tribulus terrestris L.,药用历史悠久,其全株包括果实、花、茎、叶及根均可入药。药理学研究表明,蒺藜具有降血糖、降血压以及抗肿瘤等多种药理作用。蒺藜中以甾体皂苷类为主要的活性成分,研究表明,蒺藜叶相比全草及其它药用部位所含的甾体皂苷类活性成分更高,但目前蒺藜果实和全草化学成分研究的报道较多,而蒺藜叶中化学成分的相关研究则报道很少,故本文对蒺藜叶进行了深入研究。利用现代分离手段,本文从干燥蒺藜叶中分离并鉴定出23种单体化合物(JL-1~JL-23),其中,化合物JL-12、JL-13、JL-19、JL-22为新化合物,化合物JL-7、JL-14为首次从蒺藜中分离得到的化合物,化合物JL-4、JL-5、JL-10、JL-11为首次从蒺藜叶中分离得到的化合物。新化合物中JL-13为新的螺甾型皂苷,结构特点为母核上C-25位为S构型且C-24位上连接一分子葡萄糖;JL-22为新的孕甾型皂苷,结构特点为母核上C-16位与C-22位形成内酯键;JL-12与JL-19为新的呋甾型皂苷,结构特点为糖基中有4个糖(含支链),且仅葡萄糖的C-3位连有一分子木糖。本文分离得到的这些新化合物与首次分得的化合物,进一步丰富了蒺藜中甾体皂苷类活性成分的种类和数量,为蒺藜药效物质基础的深入研究奠定了基础。在化学成分研究的基础上,本文利用基质固相分散(MSPD)的样品前处理手段结合高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)的检测方法,建立了蒺藜叶、果、茎中两种螺甾型皂苷JL-4和JL-7的含量测定方法。首先,通过单因素考察方法,确立了基质固相提取的最优条件:精密称取干燥蒺藜叶0.5000 g,粉碎后过60目筛,加入2.0 g硅胶于玛瑙研钵中混合研磨2 min后,转移到20 m L的注射器中,用20 m L石油醚淋洗,50 m L 75%(V/V)乙醇-水洗脱,收集流出液并回收溶剂,用适量甲醇溶解至1 m L容量瓶中,定容至刻线,摇匀,过0.22μm微孔滤膜,取续滤液作为供试品溶液。其次,确定了含量测定色谱条件并进行了方法学考察。实验结果显示,化合物JL-4在0.370~29.619μg、JL-7在0.366~14.646μg范围内具有良好的线性关系,R~2均为0.9992。此外,本方法的精密度、重复性、稳定性以及加样回收率的RSD值均低于1.5%(n=6),说明本方法具有精密度好、准确度高以及灵敏度较高等优点。含量测定的结果表明,蒺藜叶、果、茎中化合物JL-4、JL-7的含量差别较大,两种化合物在蒺藜叶中的含量最高,分别为3.483 mg·g-1和1.992 mg·g-1;果中含量次之,分别为0.593 mg·g-1和0.199 mg·g-1;茎中含量最低,分别为0.519 mg·g-1和0.146 mg·g-1。本文利用pNPP法考察了从蒺藜叶中分离得到的各种甾体皂苷单体对胰脂肪酶活性的抑制作用。结果发现,2种螺甾型皂苷JL-3和JL-4对胰脂肪酶活性均具有抑制作用,它们对胰脂肪酶半抑制浓度(IC50)分别为3.597±0.084 mmol·L-1和68.905±0.851 mmol·L-1,说明蒺藜叶中部分螺甾型皂苷可有效抑制胰脂肪酶活性,具有开发成天然减肥产品的应用前景。综上所述,本论文对蒺藜叶化学成分进行了深入研究,建立了蒺藜叶、果、茎中两种螺甾型皂苷的MSPD-HPLC-ELSD含量测定方法,研究了蒺藜皂苷对胰脂肪酶活性的抑制作用。本论文的研究结果为蒺藜叶药效物质的深入研究以及蒺藜叶中甾体皂苷类化合物的开发利用提供了新的科学依据。
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