【摘 要】
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尿激酶是我国最常用的溶栓药物之一,低分子量双链尿激酶是尿激酶的一种形式,在人尿提取的尿激酶中占30%,具有潜在的治疗高纤维蛋白原血症的药用价值,但是由于其半衰期较短,限
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尿激酶是我国最常用的溶栓药物之一,低分子量双链尿激酶是尿激酶的一种形式,在人尿提取的尿激酶中占30%,具有潜在的治疗高纤维蛋白原血症的药用价值,但是由于其半衰期较短,限制了其在临床上的应用。本课题利用20kDa的直链型单甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD)对低分子量双链尿激酶的N端氨基进行化学修饰以改善其药代动力学性质,延长半衰期。具体工作如下:1.通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术根据分子量初步分析了反应产物组成,利用电泳凝胶成像系统的灰度分析作为研究手段对修饰反应条件进行了优化,优选的修饰条件为:反应体系pH5.0、聚乙二醇/尿激酶质量比2:1、反应温度4℃、尿激酶浓度1 mg/mL、反应时间12h。2.随后选用了弱阳离子交换柱对定点修饰产物进行纯化,电泳凝胶灰度分析显示纯化产物为单一条带,RP-HPLC检测显示纯度在90%左右,利用TNBS法作为研究方法对定点修饰产物的氨基修饰率进行检测,结果显示定点修饰产物的氨基修饰率为5.7%,圆二色谱检测结果显示修饰前后低分子量双链尿激酶的蛋白质二级结构没有发生显著改变。3.体外活性检测显示修饰导致了一定的活性损失,修饰后蛋白体外活性为修饰前的37.2%,SD大鼠体内药动学实验显示t1/2α和药时曲线下面积修饰后分别为修饰前的5倍和2倍,实现了对低分子量双链尿激酶药代动力学性质的改善。
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