马齿苋生物碱的提取及其对人肝癌细胞抑制作用的研究

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马齿苋为马齿苋科草本植物,是我国传统的药食同源的野生植物之一。马齿苋具有多种生理活性,且作用明显。而生物碱也是一类具有良好生理活性的物质,是许多药用植物的有效成分之一。本文以马齿苋为原料,对其中的生物碱进行提取、纯化、分离及结构的初步鉴定,并对其抗肿瘤作用进行了初步的研究。马齿苋中生物碱的研究将具有良好的前景及深远的现实意义。对马齿苋成分进行系统预实验分析,最终确定马齿苋中含有多糖、黄酮类化合物、生物碱、蛋白质、酚类、皂苷、有机酸、萜类等成分。通过单因素试验及响应面优化分析软件对其进行分析,超声波辅助法可在短时间作用下大大提高生物碱的得率,不但节约了成本,还缩短了提取时间,是提取马齿苋生物碱的一种有效的新手段。生物碱的最佳提取工艺及工艺参数为提取剂乙醇浓度为95%,料液比为1:10,回流时间为1h,超声波作用时间为15min,此时总生物碱的提取率可以达到0.330g/Kg,比已报道的提高了15倍以上。生物碱的粗提液经有机溶剂乙醚萃取后,再经AB-8大孔树脂吸附,纯化的最佳条件为:生物碱的上样量为100mL,其pH值控制在2左右,洗脱剂为80%的乙醇溶剂,用量为上样量的2倍,即200mL。经过树脂纯化后的生物碱再由无水乙醇重结晶,用量为30mL。重结晶后的生物碱在0-4℃下保存8-10h,静止析晶,最后可得到白色针状马齿苋生物碱晶体。通过紫外光谱分析得到马齿苋生物碱的特征吸收峰为205 nm和273nm,综合红外光谱的特征官能团的吸收情况看,可基本明确其为生物碱类物质。通过与标准品咖啡碱的高效液相色谱对比及质谱分析,最终可以确定马齿苋生物碱其中一种成分为咖啡碱。但是马齿苋生物碱的成分组成较复杂,其分离及鉴定较为困难,还需要运用其他先进的手段进一步研究。通过MTT比色法研究了马齿苋生物碱对人肝癌细胞株BEL-7402的抑制作用。结果表明,随着生物碱浓度及培养时间的增加其抑制作用逐渐增强,当生物碱浓度为200μg/mL时,培养时间为4h,8h,24h的抑制率分别为33.74%、42.50%、50.09%。
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