我国每年屠宰生猪近5亿头，占世界生猪屠宰总量的45％，猪血资源十分丰富，但目前除少量用于制作血豆腐、血肠或直接食用外，基本未得到开发利用，不仅浪费了资源，同时又严重污染了环境。本课题以新鲜猪血为原料，利用自筛的A32菌株进行发酵，获得低分子量的猪血多肽。同时研究了猪血多肽的抗氧化、降血脂、增强免疫功能等生物活性，主要结果如下： 1．发酵猪血优良菌株的分离筛选 利用平板划线法，从农村个体屠宰场土壤中分离获得了菌株A32，该菌株在以猪血为惟一氮源的培养基上生长旺盛且蛋白酶活力强。利用该菌株发酵猪血粉，使猪血粉的蛋白质含量下降了28.7％，氨基酸态氮含量上升了4.20倍，可溶性蛋白质含量上升了60％，说明A32菌株是发酵猪血的优良菌株。 2．菌株鉴定 生理生化鉴定：革兰氏染色后为阳性，有芽孢，无伴孢晶体，该菌在细胞壁染色后菌体内呈浅色，外围有明显的紫色圈，初步鉴定为产芽孢细菌。 分子生物学鉴定：将A32菌株16s rDNA序列提交GenBank进行Blast比对，经过同源序列比较，最终鉴定A32为枯草芽孢杆菌。 3．A32菌株产蛋白酶条件研究 通过单因素试验以及正交试验确定了A32优化培养基配方：豆粕粉2％、玉米粉3％、0.4mmol／L Mn²⁺、Na₂HPO₄·12H₂O 0.4％、KH₂PO₄ 0.03％、Na₂CO₃ 0.01％、pH 7.2；同时还研究了培养时间、摇瓶转速、接种量、温度对产酶的影响，试验结果表明培养时间48h、接种量3％、温度30℃组合有利于蛋白酶的产生，摇瓶转速190r／min较为理想。 4．A32菌株发酵猪血条件的优化 在探讨了发酵时间、温度、接种量、起始pH值，装料量等单因素对猪血发酵影响的基础上，进行二次回归旋转组合设计，以接种量、发酵温度、发酵时间三个因素为自变量，以水解度DH为响应值，应用响应面分析法研究了发酵时间、发酵温度、接种量对肽产量的影响。试验结果表明，发酵温度与时间及接种量对猪血肽的生成有显著影响，发酵条件优化结果为接种量为4％、发酵温度为31℃、发酵时间为60h，根据数学模型预测值为37.97％，试验实际值为37.956％。 5．猪血多肽的分离及其成分分析