米曲霉是一种重要的工业微生物,它具有丰富的酶系,能产生多种稳定性高,能耐较高温度蛋白酶和糖酶。到目前为止,还没有在米曲霉中发现真菌毒素。因为其安全性高,广泛应用于食品,医药及饲料等工业中。提高米曲霉的蛋白酶活力成为工业生产的迫切需求。本论文从米曲霉固态发酵产物中提取出米曲霉总RNA,通过RT-PCR扩增出中性蛋白酶基因和碱性蛋白酶基因,并分别以大肠杆菌和毕赤酵母为宿主菌进行表达。主要研究内容如下：1采取异硫氰酸胍法从固态发酵的米曲霉中提取总RNA,并克隆出中性蛋白酶基因和碱性蛋白酶基因；2以质粒6HisT-pRX2为表达载体,构建重组质粒6HisT-pRX2-NIP和6HisT-pRX2-ALP,转化E.coli BL21;分别以IPTG和乳糖为诱导剂诱导蛋白酶基因表达,通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白在E.coli BL21中的表达及其表达形式；3采用Ni-NTA His-Bind Resin层析纯化带有6His·Tag的重组中性蛋白酶；采用福林芬法蛋白酶活力测定方法测定法得出纯化后重组中性蛋白酶活力为304U/g；4以pPIC9K为表达载体,构建重组质粒pPIC9K-ALPZT, pPIC9K-NIPJT,转化酵母菌GS115中；以甲醇为诱导剂诱导蛋白酶基因的表达,比较自身信号肽和酵母信号肽两种不同外分泌信号肽对米曲蛋白酶基因表达的影响。