猪繁殖与呼吸综合征病毒新疆株XJ-Q的分离鉴定及其Nsp2和ORF5基因遗传变异分析

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本研究从新疆某养殖场采集疑似猪高热病病例的肺脏,猴肾细胞(Marc-145)分离病毒、鉴定,并克隆和分析其部分功能基因。将疑似猪高热病病例的肺组织病料接种至单层Marc-145细胞上进行分离培养,盲传3代后,Marc-145细胞出现了典型的细胞病变(CPE)。使用设计的特异性鉴定引物经RT-PCR方法扩增到约430bp基因片段。测序与分析表明,分离出的病毒为PRRSV(猪蓝耳病)毒株,并命名为新疆XJ-Q病毒株。该毒株传至4代后,其半数细胞培养物感染量(TCID50)为10-5.5/0.1mL,电镜下观察到约为50nm病毒粒子。用于新疆PRRSV XJ-Q株Nsp2和ORF5基因的RT-PCR检测。经RT-PCR成功扩增出新疆XJ-Q株Nsp2的769bp和ORF5的603bp的基因片段,本试验通过比对PRRSV国内外毒株的Nsp2和ORF5基因序列,设计2对特异性引物PN1/PN2和PO1/P02,并克隆至PUCm-T质粒载体。对正确的重组质粒进行PCR鉴定、酶切和测序。序列比较结果表明,获得的XJ-Q分离株的Nsp2基因与美洲分离株VR-2332的相似性为75.8%~92.4%,与欧洲分离株LV的相似性仅为47.7%;而XJ-Q分离株的ORF5基因与美洲型分离株的相似性为88.1%~96.4%,与欧洲分离株LV毒株的相似性只有62.4%,由此说明PRRSV XJ-Q属于美洲型毒株。依据ORF5序列对国内分离株进行了系统进化分析,XJ-Q株与香港HK13和HB-1亲缘关系最近,表明美洲型毒株中XJ-Q株与HB-1株同属一个亚群。推导氨基酸的比较结果表明,新疆地区的PRRSV XJ-Q株在ORF5基因编码蛋白与毒力相关的氨基酸(13位和151位氨基酸)存在着变异。
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