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目的:
1、检测卵巢癌患者组织及血浆中E-钙粘素(E-cadherin)基因启动子异常甲基化状况,研究两者相关性,并探讨两者与临床病理特征的关系。
2、检测恶性、交界性、良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中E-cadherin蛋白表达情况,分析E-钙粘素基因启动子甲基化与蛋白表达的关系。
3、检测恶性、交界性、良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中甲基化CpG结合蛋白MeCP2表达情况,研究其对E-cad蛋白表达的影响、与基因启动子甲基化的关系以及与临床病理特征相关性。
方法:
1、采用巢式甲基化特异性PCR(nestedmethylationspecific-PCR,nMSP)技术结合单链构象多态性分析(SSCP)和DNA测序对血浆、组织中E-cadherin基因启动子甲基化情况进行分析。
2、利用免疫组化Sp法检测E-cadherin在各组卵巢组织中的表达状况。
3、应用原位杂交技术检测各组卵巢组织中甲基化结合蛋MeCP2的表达情况。
结果:
1、上皮性卵巢癌患者血浆和组织中E-cadherin基因甲基化的检出率分别为66.0％(31/47)和70.2％(33/47),均明显高于其他各组。血浆E-cadherin基因启动子甲基化状况与组织密切相关(r=0.457,P<0.05),两者甲基化总体符合率78.7％(37/47)。
2、上皮性卵巢肿瘤患者血浆和组织中E-cadherin基因的甲基化检出率在病理分级中高分化组明显高于低分化组(t=14.805,P<0.05；t=4.215,P<0.05)；上皮性卵巢癌中晚期患者血浆与组织E-cad启动子甲基化检出率均明显高于早期(t=10.900,P<0.05；t=9.323,P<0.05)；腹腔冲洗液或腹水细胞学阳性、淋巴结转移组E-cad的表达水平均高于阴性和无转移组,差异均据统计学意义(P<0.05)。
3、正常卵巢表面上皮无E-cad表达；恶性和交界性组织E-cad表达均低于良性组(t=1.81,P=0.001；t=:1.36,P=0.043)；在卵巢低分化腺癌中E-cad的表达水平低于其他类型；E-cad的表达与病理分级呈负相关(r=-0.705,P<0.05)；早期卵巢癌中E-cad的表达水平高于中晚期卵巢癌(t=2.456,P<0.05)；腹腔冲洗液或腹水细胞学阴性、淋巴结无转移组E-cad的表达水平均高于阳性和转移组,但差异尚无统计学意义(P>0.05)。
4、在正常卵巢、良性、交界性及恶性卵巢上皮组织中均有MeCP2的表达。恶性组的表达水平显著高于良性组、正常组(t=-1.79,P<0.05:t=2.05,P<0.05),但与交界组相比差异无统计学意义(t=0.08,P>0.05)；MeCP2在卵巢粘液性腺癌中的表达明显高于其他类型(F=2.754,P<0.05)；低分化癌与中高分化癌相比MeCP2的表达明显升高且有统计学差异(t=5.201,P<0.05)；中晚期卵巢癌MeCP2的表达高于早期(t=3.438；P<0.05)；腹腔冲洗液或腹水细胞学阳性、淋巴结转移者MeCP2的表达均高于阴性、无转移组,但差异尚无统计学意义(t=0.018,P>0.05；t=0.752,P>0.05)。
5、E-cad启动子甲基化组E-cad蛋白表达水平低于非甲基化组(t=8.66,P<0.05),E-cad启动子甲基化与E-cad的表达呈负相关(r=0.386,P<0.05)；上皮性卵巢癌中MeCP2蛋白表达与E-cad的表达呈负相关(r=0.312,P<0.05)；E-cad启动子甲基化与MeCP2的表达无相关关系。
6、用Kaplan-Merier方法进行无瘤生存期分析,结果显示E-cad的表达与无瘤生存率无明显相关性(Long-rank检验值为0.540,P值>0.05),但E-cad启动子非甲基化组、MeCP2阴性+弱阳性组的无瘤生存期均明显长于甲基化组和MeCP2强阳性组(Long-rank检验值分别为3.839、4.803,P<0.05)。
结论:
1、E-cad在上皮性卵巢肿瘤发生发展过程中被诱导表达,恶性及交界性上皮性卵巢癌中E-cad启动子甲基化的检出率高于正常及良性组,且与卵巢癌病理特征相关,是卵巢癌发生发展过程中的重要事件。
2、E-cad蛋白在晚期低分化卵巢癌中的表达明显低于早期高分化卵巢癌,提示在卵巢癌的浸润转移中起重要作用,可作为判断卵巢癌细胞恶性生物学行为的重要指标。
3、血浆中E-cad启动子甲基化状况与相应卵巢癌组织中有很好的对应关系,且与患者的病理分级和临床期别密切相关,有望成为一种新型、简便、无创的生物标记物应用于临床。
4、MeCP2在上皮性卵巢癌中的表达明显高于正常和良性组,在晚期低分化上皮性卵巢癌中的表达显著高于早期高分化上皮性卵巢癌,提示MeCP2基因的表达与上皮性卵巢癌的恶性程度有关,有可能成为检测上皮性卵巢癌临床病情进展及预后的生物学标记。
5、在上皮性卵巢癌中E-cad启动子甲基化与该蛋白的表达减弱明显相关,启动子甲基化是基因抑制的主要机制,但是除此之外还有其他机制参与基因的表观遗传学改变,大量的MeCP2表达与启动子甲基化共同作用导致基因沉默。
1、检测卵巢癌患者组织及血浆中E-钙粘素(E-cadherin)基因启动子异常甲基化状况,研究两者相关性,并探讨两者与临床病理特征的关系。
2、检测恶性、交界性、良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中E-cadherin蛋白表达情况,分析E-钙粘素基因启动子甲基化与蛋白表达的关系。
3、检测恶性、交界性、良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中甲基化CpG结合蛋白MeCP2表达情况,研究其对E-cad蛋白表达的影响、与基因启动子甲基化的关系以及与临床病理特征相关性。
方法:
1、采用巢式甲基化特异性PCR(nestedmethylationspecific-PCR,nMSP)技术结合单链构象多态性分析(SSCP)和DNA测序对血浆、组织中E-cadherin基因启动子甲基化情况进行分析。
2、利用免疫组化Sp法检测E-cadherin在各组卵巢组织中的表达状况。
3、应用原位杂交技术检测各组卵巢组织中甲基化结合蛋MeCP2的表达情况。
结果:
1、上皮性卵巢癌患者血浆和组织中E-cadherin基因甲基化的检出率分别为66.0％(31/47)和70.2％(33/47),均明显高于其他各组。血浆E-cadherin基因启动子甲基化状况与组织密切相关(r=0.457,P<0.05),两者甲基化总体符合率78.7％(37/47)。
2、上皮性卵巢肿瘤患者血浆和组织中E-cadherin基因的甲基化检出率在病理分级中高分化组明显高于低分化组(t=14.805,P<0.05；t=4.215,P<0.05)；上皮性卵巢癌中晚期患者血浆与组织E-cad启动子甲基化检出率均明显高于早期(t=10.900,P<0.05；t=9.323,P<0.05)；腹腔冲洗液或腹水细胞学阳性、淋巴结转移组E-cad的表达水平均高于阴性和无转移组,差异均据统计学意义(P<0.05)。
3、正常卵巢表面上皮无E-cad表达；恶性和交界性组织E-cad表达均低于良性组(t=1.81,P=0.001；t=:1.36,P=0.043)；在卵巢低分化腺癌中E-cad的表达水平低于其他类型；E-cad的表达与病理分级呈负相关(r=-0.705,P<0.05)；早期卵巢癌中E-cad的表达水平高于中晚期卵巢癌(t=2.456,P<0.05)；腹腔冲洗液或腹水细胞学阴性、淋巴结无转移组E-cad的表达水平均高于阳性和转移组,但差异尚无统计学意义(P>0.05)。
4、在正常卵巢、良性、交界性及恶性卵巢上皮组织中均有MeCP2的表达。恶性组的表达水平显著高于良性组、正常组(t=-1.79,P<0.05:t=2.05,P<0.05),但与交界组相比差异无统计学意义(t=0.08,P>0.05)；MeCP2在卵巢粘液性腺癌中的表达明显高于其他类型(F=2.754,P<0.05)；低分化癌与中高分化癌相比MeCP2的表达明显升高且有统计学差异(t=5.201,P<0.05)；中晚期卵巢癌MeCP2的表达高于早期(t=3.438；P<0.05)；腹腔冲洗液或腹水细胞学阳性、淋巴结转移者MeCP2的表达均高于阴性、无转移组,但差异尚无统计学意义(t=0.018,P>0.05；t=0.752,P>0.05)。
5、E-cad启动子甲基化组E-cad蛋白表达水平低于非甲基化组(t=8.66,P<0.05),E-cad启动子甲基化与E-cad的表达呈负相关(r=0.386,P<0.05)；上皮性卵巢癌中MeCP2蛋白表达与E-cad的表达呈负相关(r=0.312,P<0.05)；E-cad启动子甲基化与MeCP2的表达无相关关系。
6、用Kaplan-Merier方法进行无瘤生存期分析,结果显示E-cad的表达与无瘤生存率无明显相关性(Long-rank检验值为0.540,P值>0.05),但E-cad启动子非甲基化组、MeCP2阴性+弱阳性组的无瘤生存期均明显长于甲基化组和MeCP2强阳性组(Long-rank检验值分别为3.839、4.803,P<0.05)。
结论:
1、E-cad在上皮性卵巢肿瘤发生发展过程中被诱导表达,恶性及交界性上皮性卵巢癌中E-cad启动子甲基化的检出率高于正常及良性组,且与卵巢癌病理特征相关,是卵巢癌发生发展过程中的重要事件。
2、E-cad蛋白在晚期低分化卵巢癌中的表达明显低于早期高分化卵巢癌,提示在卵巢癌的浸润转移中起重要作用,可作为判断卵巢癌细胞恶性生物学行为的重要指标。
3、血浆中E-cad启动子甲基化状况与相应卵巢癌组织中有很好的对应关系,且与患者的病理分级和临床期别密切相关,有望成为一种新型、简便、无创的生物标记物应用于临床。
4、MeCP2在上皮性卵巢癌中的表达明显高于正常和良性组,在晚期低分化上皮性卵巢癌中的表达显著高于早期高分化上皮性卵巢癌,提示MeCP2基因的表达与上皮性卵巢癌的恶性程度有关,有可能成为检测上皮性卵巢癌临床病情进展及预后的生物学标记。
5、在上皮性卵巢癌中E-cad启动子甲基化与该蛋白的表达减弱明显相关,启动子甲基化是基因抑制的主要机制,但是除此之外还有其他机制参与基因的表观遗传学改变,大量的MeCP2表达与启动子甲基化共同作用导致基因沉默。