【摘 要】
：
目的:探索乙脑/寨卡嵌合病毒JE/ZIKV（Japanese encephalitis/Zika chimeric virus）中寨卡病毒包膜蛋白（Envelope protein,E）第 158 或 169位氨基酸突变（Y158H和V169I）对小鼠脑内神经毒力的影响,探寻控制嵌合病毒小鼠脑内神经毒力的关键氨基酸位点,为寨卡病毒疫苗候选株的安全性评价提供理论基础。方法:以嵌合病毒JE/ZIKV（
论文部分内容阅读
目的:探索乙脑/寨卡嵌合病毒JE/ZIKV（Japanese encephalitis/Zika chimeric virus）中寨卡病毒包膜蛋白（Envelope protein,E）第 158 或 169位氨基酸突变（Y158H和V169I）对小鼠脑内神经毒力的影响,探寻控制嵌合病毒小鼠脑内神经毒力的关键氨基酸位点,为寨卡病毒疫苗候选株的安全性评价提供理论基础。方法:以嵌合病毒JE/ZIKV（MR766）全长cDNA质粒为模板,首先运用重叠延伸PCR技术和基因重组技术得到含突变位点的病毒全长cDNA,经测序及酶切鉴定,大量抽提质粒,将大抽质粒Xhol单酶切线性化,以.此为模板体外转录得到嵌合病毒RNA,把RNA电转染导入BHK21细胞拯救得到突变病毒JE/ZIKV（Y158H）和JE/ZIKV（V169I）。通过病毒基因测序、间接免疫荧光实验、生长曲线及蚀斑实验鉴定病毒,并用3周龄昆明小鼠评价突变病毒对小鼠的脑内神经毒力。结果:测序及酶切鉴定证实成功构建JE/ZIKV（Y158H）和JE/ZIKV（V169I）的病毒全长cDNA。蚀斑实验证实转染RNA的细胞培养液上清含有病毒。间接免疫荧光实验表明拯救的两个突变病毒能被抗JEV-NS1抗体识别,不被抗JEV-E抗体识别。病毒测序结果证实成功拯救嵌合病毒并成功引入Y158H或V169I突变位点。蚀斑实验发现:JE/ZIKV蚀斑直径为 1.7±0.2mm,JE/ZIKV（Y158H）蚀斑直径为 1.6±0.1mm,两者之间差异无统计学意义（t=2.46,P=0.09＞0.05）。JE/ZIKV蚀斑直径为1.6±0.4mm,JE/ZIKV（V169I）蚀斑直径为1.4±0.4mm,差异无统计学意义（t=0.99,P=0.35＞0.05）。生长曲线显示 JE/ZIKV（Y158H）和 JE/ZIKV（V169I）增殖速度均在 60h 达高峰,JE/ZIKV（Y158H）和 JE/ZIKV（V169I）增殖规律相似,但整个病毒增殖过程中JE/ZIKV（Y158H）的增殖效率都略低于原母本病毒JE/ZIKV（MR766）,JE/ZIKV（V169I）在前60h和母本病毒一样快速增殖,之后下降幅度比原病毒更大。动物实验结果表明:JE/ZIKV（Y158H）小鼠脑内神经毒力 LD50 为 1964.33 PFU/mL,JE/ZIKV（V169I）小鼠脑内神经毒力LD50为621.33 PFU/mL,而母本病毒JE/ZIKV（MR766）小鼠脑内神经毒力 LD50 为 73.67 PFU/mL。结论:寨卡病毒E蛋白Y158H或V169I突变可以降低JE/ZIKV（MR766）小鼠脑内神经毒力,E158 和 E169 是控制JE/ZIKV（MR766）小鼠脑内神经毒力的两个重要氨基酸位点,其中E158作用更为明显。
其他文献
目的:探索经肛门全直肠系膜切除术（taTME）对患者生活质量与器官功能的影响。方法:采用回顾性病例系列研究方法,收集川北医学院附属南充市中心医院胃肠外科于2018年7月至2019年5月行经肛门全直肠系膜切除术治疗的直肠癌患者的临床与随访资料,分析患者生活质量、泌尿功能、排便功能的变化情况。生活质量采用EORCTQLQ-C30生活质量量表评估,泌尿功能采用IPSS评分评估,排便功能采用LARS评分评
目的:研究长链非编码RNA（lnc RNA）结肠癌相关转录因子1（CCAT1）在胃癌中的表达情况以及与胃癌患者临床病理特征之间的关系,并通过构建CCAT1下调质粒来观察CLIC1的表达变化,分析可能存在的调控机制。方法:（1）针对20例胃癌和对应的癌旁组织样本进行检测,基于RT-qPCR方法确定出其中lncRNACCATl的表达水平,且进行对比分析。（2）基于所得结果研究胃癌组织中CCAT1表达水
目的:通过对胆囊结石（Gallbladder stones,GS）合并胆总管结石（Common Bill Dust Stones,CBDS）患者分别行腹腔镜下胆囊切除术（laparoscopic cholecystectomy,LC）+内镜逆行胰胆管造影（endoscopic retrograde cholangiopancreatography,ERCP）的同期或分期治疗临床疗效的比较。探讨LC
目的:探究使用机器人行中下段直肠癌全直肠系膜切除术的近期疗效与使用腹腔镜相比,是否存在优势。方法:采用meta分析的方法,收集2010年1月至2020年12月比较机器人全直肠系膜切除术（robotic total mesorectal excision,RTME）和腹腔镜全直肠系膜切除术（laparoscopic total mesorectal excision,LTME）近期疗效的中英文文献,
目的:分析探讨腔内激光闭合术（endovenous laser ablation,EVLA）与传统剥脱手术（conservative surgery,CS）治疗原发性大隐静脉曲张的临床疗效,比较两种不同术式的优劣势及术后并发症的差异。材料与方法:回顾性分析2019年1月至2020年12月南充市中心医院收治的单下肢原发性大隐静脉曲张患者共286例。根据手术方式的不同分为EVLA组和CS组,其中EVL
目的:探讨腹腔镜胆总管切开联合胆道镜取石+胆总管一期缝合治疗肝外胆管结石合并黄疸患者的临床疗效。方法:通过回顾性分析2018年4月-2021年3月自贡市第一人民医院收治的179例肝外胆管结石合并不同程度黄疸的患者行双镜联合取石+胆总管一期缝合的临床资料。观察分析无黄疸A组（93例）、B组黄疸组（86例）的临床资料,比较A、B两组患者手术时间、住院时间、术中出血量、术后胃肠恢复时间、术后并发症（术后
研究背景:随着社会进步及人口老龄化加速,心血管疾病（Cardiov ascular disease,CVD）的患病率及死亡率持续上升,已位居我国居民死亡原因之首。动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是CVD的主要病理基础,其详细的发病机制至今尚未完全明确。SIRT7是Sirtuins家族中的关键成员,属于高度保守的、具有NAD+依赖性的Ⅲ类去乙酰化酶,可参与蛋白质生物合成、细胞应激
目的:通过对非综合征家族型主动脉夹层核心家系的外显子测序,筛选非综合征家族型主动脉夹层的易感基因。方法:筛查收集我院病案库里从2008年10月至2020年7月诊断为“主动脉夹层”的非综合征家族型患者及其家系成员的血液及病例信息,通过血液样本的DNA提取、质量检测、文库构建、文库检测和计算机测序、生物信息学分析等实验步骤,并根据生物学功能、突变频率等因素进一步总结非综合征家族型主动脉夹层的易感基因。
目的:通过检测三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer,TNBC）组织与乳腺纤维腺瘤组织中白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）的差异性表达,结合临床病理资料,分析探讨IL-6在三阴性乳腺癌组织中的差异性表达与患者临床病理特征之间的关系及其对患者长期预后的影响。方法:收集2010年1月至2019年1月川北医学院附属医院甲状腺乳腺外科经手术切除的三阴性乳
目的:探讨非编码 RNA（linc00173、linc00963、miR-182-5p）和自噬相关基因（Beclin1、mTOR、ATG14、ULK1、ATG13、ATG101、ATG17、ATG2、ATG9A、ATG18、LC3-2）在痛风患者中的表达变化特点以及探讨非编码RNA（linc00173、linc00963、miR-182-5p）和自噬相关基因 LC3-2 在痛风炎症中的调控作用。方