探索研究在恶性胸膜间皮瘤中EZH2与Hedgehog通路的相关性

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lsylianyangdeyu
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研究背景:恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)是一种高侵袭性肿瘤,临床上缺少有效治疗手段,预后较差。目前,恶性胸膜间皮瘤的发病机制并未得到完全阐明,探索MPM相关分子通路的变化,不仅有助于揭示MPM的分子机制,而且将为治疗提供新的靶点和途径。已有研究表明Cul4A蛋白通过Hegdehog通路中Gli1蛋白调节恶性胸膜间皮瘤发生发展。EZH2与非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤细胞的生长及预后具有相关性,前期研究通过染色质免疫共沉淀-启动子芯片技术(CHIP-on-chip)检测 EZH2在不同类型非小细胞肺癌细胞株中的结合调控基因结果提示:在不同类型非小细胞肺癌细胞中EZH2与Cul4A基因启动子均有结合,Cul4A可能是EZH2调控的靶基因,我们推测在恶性胸膜间皮瘤中可能存在EZH2-Cul4A-Gli1调控通路通路,参与恶性胸膜间皮瘤的发生发展。  目的:检测恶性间皮瘤细胞H2452、MSTO-211H以及人正常间皮细胞株Met-5A中EZH2、Cul4A、Gli1基因的表达情况和恶性间皮瘤患者病理组织中EZH2、Cul4A、Gli1蛋白的表达并明确其相关性。  方法:  1.Real-time PCR检测恶性间皮瘤细胞株H2452、MSTO-211H以及人正常间皮细胞株Met-5A中EZH2、Cul4A、Gli1mRNA的表达量;  2.利用siRNA下调EZH2基因后检测Cul4A、Gli1mRNA的表达变化;  3.导入外源 EZH2基因后检测Cul4A、Gli1mRNA的表达变化;  4.利用免疫组化技术检测在石蜡包埋间皮瘤组织中EZH2、Cul4A、Gli1表达及分析其相关性。  结果:  1.根据Real-time PCR的结果发现:EZH2高表达的H2452细胞中,Gli1呈高表达, Cul4A表达量无明显差异;EZH2低表达的MSTO-211H细胞中,GLI1呈低表达,Cul4A呈高表达。  2.根据Real-time PCR的结果发现:在EZH2高表达的H2452细胞中,敲除EZH2基因48小时后,Gli1表达量下降,Cul4A表达量无明显差异。  3.根据Real-time PCR的结果发现:在EZH2低表达的MSTO-211H细胞中,导入外源性EZH2基因48小时后,Gli1表达量升高,Cul4A表达量无明显差异。  4.免疫组织化学染色结果提示:在恶性胸膜间皮瘤组织中EZH2与Gli1表达存在正相关(rs=0.815,P<0.05)  5.免疫组织化学染色结果提示:在恶性胸膜间皮瘤组织中EZH2与Cul4A表达无相关性(rs=0.145,P>0.05)。  6.免疫组织化学染色结果提示:在恶性胸膜间皮瘤组织中Cul4A与Gli1表达呈正相关(rs=0.577,P<0.05)。  结论:  1.在EZH2高表达的H2452细胞中,Gli1同时有高表达,敲除EZH2基因后Gli1表达随之下降。在EZH2低表达的MSTO-211H中,Gli1同时有低表达,在导入EZH2基因后, Gli1表达随之升高;EZH2与Cul4A表达差异无明显相关性。提示Gli1可能受到EZH2的调控,EZH2可能参与调控Hegdehog信号传导通路。  2.免疫组织化学染色检测在恶性胸膜间皮瘤组织中,EZH2与Gli1表达呈正相关, Cul4A与Gli1的呈正相关, EZH2和Cul4A表达无明显相关性。提示Cul4A可能参与Hegdehog信号传导通路,但并未受EZH2直接调控。
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