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目的:系统性硬化症( systemic scLerosis,SSc)的发病和肺脏与免疫功能密切相关。本研究通过观察麦门冬汤的治疗作用及其对博来霉素所致 BALB/C 硬皮病小鼠 CD4+T、CD8+T 细胞、巨噬细胞的活化等影响;对抑制胶原产生的细胞 IL-10、TNF-γ的影响;对导致成纤维细胞活化生长的细胞因子 TGF-β、CTGF、PDGF、IL-4、IL-6、TNF-α等的影响;对免疫器官胸腺、脾脏的影响;对皮肤和肺脏的病理学改变、皮肤胶原含量、羟脯氨酸检测及皮肤和肺组织中 TNF-α、TGF-β、CTGF、PDGF、IL-10 表达的影响,探讨麦门冬汤在治疗 SSc 过程中对“卫气(免疫功能)”与“肺和皮毛”的作用及其机理。
方法:硬皮病小鼠模型建立后,随机将 60 只小鼠分为模型组、麦门冬高、中、低剂量组,并设正常对照组即正常对照组。治疗三周后采集标本,用流式细胞仪检测小鼠外周血中 CD+4 T 细胞、CD+8 T 细胞的含量;用 ELISA 法检测血清 IL-10、TNF-γ、TGF-β、CTGF、 PDGF、IL-4、IL-6、TNF-α及肺组织中 TNF-α、TGF-β、CTGF、PDGF、IL-10 的含量;用台盼蓝染色法计算小鼠巨噬细胞的活力;切取小鼠背部注射区皮肤及肺部组织,切成 2 块,1 块固定 10 %甲醛液,石蜡包埋用于苏木素-伊红(HE)染色和 Masson 染色,另 1 块匀浆备用,用以测定单位皮肤及肺组织中羟脯氨酸的含量;取胸腺、脾脏,计算其脏器指数;数据皆采用 SPSS18.0统计分析软件包分别求得各组的数据均值和标准差(χ±S ),做 t 检验。
结果:( 1)麦门冬汤能降低模型组小鼠的胸腺指数( P<0.01);提高腹腔巨噬细胞活力( P<0.01);提高模型组小鼠CD4+T、CD8+T的含量(P<0.01);( 2)麦门冬汤能降低模型组小鼠皮肤厚度、肺纤维化指数及羟脯氨酸的含量(P<0.01);( 3)麦门冬汤能降低模型组小鼠外周血中IL-10、TNF-γ、TGF-β、CTGF、PDGF、TNF-α、IL-4、IL-6的含量( P<0.01);( 4)麦门冬汤能降低模型组小鼠皮肤中CTGF、PDGF、IL-10、TGF-β、TNF-α的含量( P<0.01);( 5)麦门冬汤能降低模型组小鼠肺中CTGF、PDGF、IL-10、TGF-β、TNF-α的含量(P<0.01)。
结论:( 1)SSc 的成因中医学认为是腠理不密,肺失宣降为内因,外邪侵袭是诱发因素。“卫外不固,肺失宣降”是 SSc 发生的重要环节,恢复卫气及肺的功能发挥着举足轻重的作用;通过该实验提示治疗肺痿的代表方——麦门冬汤可以调节小鼠的免疫功能,并对 SSc 具有一定的治疗作用。( 2)麦门冬汤对小鼠 SSc 有良好的治疗效果。( 3)麦门冬汤对小鼠 SSc 具有量效关系。(4)麦门冬汤治疗 SSc 的机制可能与提高硬皮病模型小鼠腹腔巨噬细胞的活力, CD+4T、CD+8T 的含量;降低皮肤的厚度、羟脯氨酸的含量、皮肤和肺脏的纤维化指数、TNF-α、TGF-β、CTGF、PDGF、IL-10 的含量及外周血 IL-10、干扰素-γ、TGF-β、CTGF、PDGF、IL-4、IL-6、TNF-α的含量有关。