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microRNA(miRNA)是一类长度为20-25nt,从具有发夹结构的前体加工而来的能够调控基因功能的非编码RNA。在生物的整个发育过程中miRNA可以调节细胞早期发育,参与细胞分化和组织发育,调控基因表达。在人和哺乳动物中miRNA主要通过结合靶mRNA 3’端非翻译区(3’UTR)抑制其蛋白表达,从而参与靶基因调控的生物学过程。在miRNA的加工成熟过程中,Drosha是miRNA其中一个非常重要的酶。当抑制了Drosha表达后,miRNA的加工途径就会受到破坏,随之成熟miRNA的整体表达水平则会迅速下调。转录因子(transcription factor,TF)作为真核生物表达调控核心,在不同细胞、组织,不同发育阶段,不同刺激因素等条件下,精确地控制着基因的表达,一旦它们的功能受到破坏就可能导致肿瘤等疾病的发生。本研究为了揭示miRNA在肿瘤发生发展中的作用,一方面将肿瘤相关转录因子如p53和p21等的启动子区构建到荧光素酶载体中,抑制Drosha后,检测miRNA对不同基因转录活性的影响,进而深入分析miRNA的作用方式;另一方面,利用miRNA传统寻靶方法,构建重要肿瘤基因RAC1、K-Ras和GADD45A等的3’UTR荧光素酶报告载体,利用双荧光报告基因技术对可能调控肿瘤基因的miRNA进行了筛选和验证.。本文获得的主要进展有:1.发现了可以影响p21启动子区进而下调p21表达的miRNA分子--miR-100,并证明miR-100对p21表达的抑制作用依赖p53。这表明miRNA不仅可以直接作用于基因的3’UTR区,也可以通影响基因启动子区进而下调基因的表达。2.发现了miR-193b新的靶基因K-ras,miR-193b可以通过结合K-ras的3’UTR从而在转录后水平抑制K-ras的表达。总之,本研究不仅运用miRNA寻靶的传统研究方法获得了miR-193b的靶基因k-ras,而且通过抑制Drosha,使miRNA整体水平下调,筛选出影响p21基因启动子区的miR-100,这种方法打破了传统的miRNA寻靶方法,对多途径寻找miRNA调控靶基因具有启示意义。