本论文通过培养微生物得到糖基水解酶-薯蓣皂苷糖苷酶,用葡聚糖凝胶柱,离子交换柱将目的酶蛋白提纯,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱法对提纯的蛋白进行纯度检测和分子量鉴定,并对其酶性质和反应特异性做了研究;鉴定了其蛋白翻译后修饰形式为糖基化,并确定了薯蓣皂苷糖苷酶的糖基化修饰形式,最后分析了其糖基化位点,进一步为深入研究该酶的特异性水解机制提供理论基础。首先,利用 Sephadex G-75、DEAE-Cellulose DE52 柱对微生物Absidia sp.D00d 菌发酵产生的薯蓣皂苷糖苷酶进行分离提纯,用HPLC法和SDS-PAGE法对该酶进行了纯度检测,并测定了蛋白分子量为55kDa。其次对该酶的性质研究表明:其最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0-7.0;最适反应温度是50℃,温度稳定范围为20-60℃。K+、Na+、Mg2+、Ca2+四种金属离子对薯蓣皂苷糖苷酶的酶活力均无影响;而Zn2+对薯蕷皂苷糖苷酶有一定的抑制作用,且随着离子浓度的增大,其抑制作用也增大;Cu2+和Fe3+离子则对薯蓣皂苷糖苷酶有明显的抑制作用,几乎完全抑制酶活力。最大反应速度 Vmax 为 3.49mmol/L·h,米氏常数 Km 为 4.13mmol/L。利用化学法,三氟甲磺酸确定了薯蓣皂苷糖苷酶蛋白翻译后修饰形式为糖基化。采用生物法,利用肽N-糖苷酶F确定了其糖基化修饰形式为N-糖基化。通过电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱法检测表明,确定了其糖基化位点所在肽段,并采用串联质谱进一步分析其糖基化位点,结果表明其糖基化位点为N1EWYDWVGSLVSN2YSIDGLR中的N2。