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本文通过检测转录因子Oct 4(Octamer-binding transcription factor 4)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶6(Caspase 6,Cysteinyl aspartate specific proteinase6)在牦牛(Bos grunneins)卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的表达,分析Oct4和Caspase 6在卵母细胞与体外受精胚胎发育过程中的作用。采用收集的牦牛卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-Oocyte Complexes,COCs),对其进行体外成熟培养,生产体外受精(In Vitro Fertilization,IVF)胚胎,评估各时期胚胎发育能力;采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和间接免疫荧光染色方法从基因和蛋白水平检测COCs和胚胎各时期Oct 4和Caspase 6的表达与分布;在此基础上,通过在卵母细胞体外成熟培养过程中添加不同浓度的LIF,运用qRT–PCR和间接免疫荧光染色技术检测不同浓度LIF对成熟COCs中Oct 4和Caspase 6的表达,从而探讨LIF在卵母细胞成熟过程中的调控作用。研究结果显示:(1)体外培养的2–4 cells胚胎、5–8 cells胚胎、9–16 cells胚胎和囊胚的发育率分别为(64.66±1.76)%、(43.33±1.76)%、(24.66±2.40)%和(9.33±0.67)%。(2)Oct 4基因在COCs和胚胎各发育时期均被检测到,其中9–16 cells胚胎表达最高,依次为囊胚、2–4 cells胚胎和5–8 cells胚胎,未成熟COCs和成熟COCs中表达最低;Caspase 6基因在COCs和胚胎各发育时期均有表达,在9–16 cells胚胎和囊胚中表达较高,且9–16 cells胚胎相对表达量要高于囊胚,依次为2–4 cells胚胎、5–8 cells胚胎,未成熟COCs和成熟COCs。(3)OCT 4蛋白主要分布在COCs和体外受精胚胎的细胞质中,在细胞核中表达较弱;9–16 cells胚胎IOD值最高,依次为囊胚、2–4 cells胚胎,5–8 cells胚胎最低;CAS6蛋白表达的位置在细胞质中。(4)在COCs成熟过程中添加LIF后可提高Oct 4基因表达,降低Caspase6基因的表达;当LIF浓度为100 ng?m L-1时,Oct 4基因相对表达量最高,Caspase6基因的相对表达量最低。上述研究表明,Oct 4和Caspase 6在牦牛卵母细胞和早期胚胎发育过程中的各个时期均有表达且存在差异性,并发现LIF在COCs成熟过程中影响Oct 4和Caspase 6的表达。实验结果为研究LIF在COCs成熟过程中发挥的作用提供理论依据,有助于牦牛体外受精和早期胚胎培养技术的完善。