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【研究背景】代谢重编程在肿瘤发生与进展中发挥关键作用,三羧酸循环是细胞内糖、脂和氨基酸代谢的共有途径。琥珀酸脱氢酶SDH(Succinatedehydrogenase),即呼吸链复合体II,是调控三羧酸循环及氧化呼吸电子传递链的关键酶,由SDHA、SDHB、SDHC及SDHD四个亚基组成。以往研究证实,SDH功能缺失可促进骨肉瘤、大肠癌等多种肿瘤的生长。然而,作为体内负责代谢的重要器官,肝脏肿瘤发生与进展中SDH表达与功能是否发生异常尚不十分清楚。为此我们拟以肝癌细胞、临床组织及动物模型为对象,系统分析肝癌细胞中SDH各亚基表达及功能是否发生异常,及其表达与患者预后相关性。进一步对SDH在肝癌生长中的调控作用与机制进行深入研究。【研究目的】1.通过对肝癌组织中SDHA、SDHB、SDHC及SDHD表达分析,明确SDH各亚基表达水平是否发生改变及其与肝癌患者预后是否相关。2.通过干涉或过表达SDHC抑制或激活SDH复合体功能后,检测细胞增殖、凋亡及肿瘤生长,从而明确SDH功能异常对肝癌恶性进展的影响。3.通过干涉或过表达SDHC抑制或激活SDH复合体功能后,检测细胞内ROS水平与NFκB活性,探讨SDH功能异常影响肝癌促进肿瘤恶性进展的分子机制。【研究方法】1.利用Western blot,qPCR及IHC技术检测SDHA、SDHB、SDHC及SDHD在肝癌中表达变化;2.利用Kaplan-Meier法分析SDHA、SDHB、SDHC及SDHD分子与肝癌患者总体生存与无复发生存的影响;3.利用商品化SDH活性检测试剂盒,分析肝癌中SDH亚基表达改变对SDH活性与功能的影响;4.利用MTS,EdU及克隆形成实验,体外分析SDH复合体功能异常对肝癌细胞增殖与生长的影响;5.利用流式细胞术分析SDH复合体功能异常对肝癌细胞凋亡的影响;6.利用裸鼠皮下成瘤实验,体内检测SDH复合体功能异常对肿瘤生长的影响;7.利用流式细胞术分析SDH复合体功能异常对胞内ROS水平的影响;8.利用Western blotd等技术,检测SDH复合体功能异常对NFκB通路的影响。【研究结果】1.Western blot,qPCR及IHC实验结果表明SDHA、SDHB、SDHC及SDHD在肝癌中低表达;2.Kaplan-Meier法分析结果表明SDHA、SDHB、SDHC及SDHD分子低表达肝癌患者预后较差;3.SDH活性检测结果表明下调SDHA、SDHB、SDHC及SDHD分子表达均可抑制SDH复合体活性,且下调SDHC的抑制效果更显著;4.MTS,EdU及克隆形成体外实验结果表明,SDH复合体功能异常促进肝癌细胞的增殖和生长;5.流式细胞术检测凋亡实验结果表明SDH复合体功能异常抑制肝癌细胞凋亡;6.裸鼠皮下成瘤实验结果表明SDH复合体功能异常促进肿瘤生长;7.流式细胞术实验结果表明,SDH复合体功能异常可提高胞内ROS水平;8.Western blot实验结果表明SDH复合体功能异常激活肝癌细胞内NFκB信号通路。【研究结论】本研究证实肝癌细胞中SDH亚基SDHA、SDHB、SDHC及SDHD表达降低致SDH复合体功能被抑制,进而通过激活ROS/NFκB通路促进肝癌细胞的增殖与生长。