食品质量安全不仅与微生物的种类有关,而且与微生物的数量密切相关。长期以来,食品微生物的检测以培养法为金标准,虽然灵敏度符合市场需求,但也存在结果不全面、实验时间长、操作要求高等局限性。本课题利用流式细胞术,建立了水中微生物的检测方法,构建了Cyto MICRO试剂盒,搭建了乳制品中微生物快速检测云平台,开展了方法、试剂盒与系统在乳及乳制品实际样品微生物检测的应用研究。饮用水安全对于我们生活与生产至关重要,世界上每3人有1人无法获得安全饮水,水中微生物的快速检测方法成为研究的热点。本文以流式细胞术为方法,水中微生物为对象,建立了基于流式细胞术的水中微生物的快速检测方法。利用人工污染样结果表明:荧光染料SYTO~?9最佳添加量为5μL,荧光染料PI最佳添加量5μL,36±1℃下最佳染色孵育时间为10min,进样速度为30μL/min,上机检测时间为60s。人工污染样微生物浓度在10~3cell/m L～10~6cell/m L范围内,相对标准偏差小于5%,具有良好的重复性。由于水样中微生物浓度较低,需要进行前处理,研究中采用滤膜富集方法,实验结果表明:富集滤膜材质为水系MCE膜,滤膜孔径为0.22μm,样品富集量为1000m L,最终检测结果的回收率为86.67%。利用该方法对学校某大楼的自来水进行实样检测,结果表明:微生物总数为1.65×10~5cell/m L～2.04×10~5cell/m L,活性细菌数量约为2.61×10~3cell/m L～4.00×10~3cell/m L,同时开展的以GB/T5750.12-2006平板计数法,得水中菌落总数<100CFU/m L。两种方法的结果存在差异,分析表明,可能原因是,自来水中营养物质匮乏,微生物处于亚致死或休眠状态,现行国标方法仅能培养好氧微生物,而流式细胞术能对样品中所有的生物性颗粒物进行直接计数,因此,通过流式细胞术获得的微生物数远大于国标法微生物计数结果。本文构建了基于流式细胞术的Cyto MICRO试剂盒,制定了Cyto MICRO--发酵乳中乳酸菌计数操作规范。以ISO16140和SN/T2775-2011为评价依据,GB4789.35-2016为参比方法对试剂盒进行了效能评价与优化。结果表明:本试剂盒方法的最低检测限为10~3cell/m L;在设置的三种温度下检测结果显著性水平P>0.05,耐变性良好;对于检测的样品,靶标微生物的终浓度控制在10~3-10~7cell/m L,重现性为RSD小于10%;本试剂盒在0-4℃避光下可保存10周。利用试剂盒对市售21份发酵乳产品进行检测,采用流式细胞术的检测方法的结果与GB4789.35-2016平板计数法结果相关性P=0.9318。实践中,流式细胞术在微生物检验中的推广仍存在不少难题,如流式细胞仪较昂贵,结果分析需要较多的经验积累等。课题组开发了乳制品中微生物快速检测云平台,用户登录APP,在手机端与中央实验室的PC端实现数据的传递,按要求递送样品,通过在中央实验室部署的流式细胞仪,对样品进行检测,对数据进行分析,结果通过云端传递,搭建了采样-送样-检测-分析闭环架构。可解决方法仪器单价高,结果解读困难的问题,有助于流式细胞术微生物检测技术的推广。