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目的通过大肠癌体外细胞模型,利用RNA干扰技术,探讨ATM基因沉默是否对大肠癌HT29细胞的放射敏感性有影响。方法设计并构建ATM基因小分子干扰RNA(Small interfering RNA, siRNA)真核表达质粒pSilencer2.1-ATM,并转染人大肠癌HT29细胞株作为阳性组；ATM基因RNAi寡聚脱氧核糖核酸序列随机重新排列后构建非特异性siRNA,并转染pSilencer2.1-nonspecific质粒作为阴性组,未转染为对照组。各组分别采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)检测各组ATM基因的mRNA含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测每组ATM基因mRNA表达的蛋白质含量,各组细胞经8Gy X线照射后,分成两部分,分别继续培养24 h、48 h,然后采用流式细胞仪检测不同时间点(24 h、48 h)的阳性组、阴性组以及对照组的细胞周期分布和细胞凋亡情况。结果ATM基因siRNA真核重组表达质粒构建后成功转染大肠癌HT29细胞。RT-PCR检测证实阳性组ATM基因的mRNA含量明显下降；Western blot结果证实阳性组细胞ATM基因所表达蛋白量明显减少。经X线照射后24h,阳性组G1+Go期、G2+M期细胞比例较对照组均减少(t=-11.59,P<0.001；t=-4.30,P<0.001),但阴性组与对照组相比无明显差别(t=0.02,P=0.98；t=-0.03,P=0.97)；照射48h后,G1+Go期、G2+M期细胞比例同样较对照组减少(t=-9.91,P<0.001；t=-4.94,P<0.001),阴性组与对照组同样无明显差别(t=0.08,P=0.94；t=0.09,P=0.93)；照射后24、48 h阳性组细胞凋亡率均高于对照组(t=21.15,P<0.001；t=32.94,P<0.001),阴性组与对照组相比无明显差别(t=1.56,P=0.12；t=1.86,P=0.06)。结论1.通过构建ATM基因siRNA的真核重组表达质粒,并转染人大肠癌HT29细胞,有效抑制了ATM基因的转录以及表达。2.ATM基因被沉默后,增强了大肠癌HT29细胞的放射敏感性,其机制可能与抑制DNA损伤修复、使G1+G0期和G2+M期细胞周期检测点失活、增加细胞凋亡率有关。