重金属Hg2+单克隆抗体的制备与ELISA检测方法研究

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重金属是一类很重要的污染物,在生物体内长期积累不可降解,极其微量的情况下也会产生不良后果。重金属通过食物链蓄积到人体中,可引起各种疾病甚至癌症,其危害还能遗传到下一代。汞是毒性最强的重金属元素之一,因此重金属在环境、农产品中残留的监测是非常重要的。目前汞的检测方法仍然依赖传统仪器,与传统检测方法相比免疫检测方法具有检测快速、费用低、易于操作、简单易携、而且高灵敏性和可选择性等特点,近年来日益受到国内外广泛的关注。本研究以谷胱甘肽(GSH)作为双功能螯合剂偶联Hg2+和匙孔血蓝蛋白(KLH),获得完全抗原KLH-GSH-Hg2+。用该抗原在佐剂的辅助下免疫BALB/C小鼠。免疫5次后,用间接ELISA方法检测免疫小鼠抗血清,含Hg2+抗原(BSA-GSH-Hg2+)检测OD值远大于无Hg2+抗原(BSA-GSH)。此后经过细胞融合、杂交瘤筛选以及克隆化等步骤,建立了稳定分泌抗重金属Hg2+的单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C3,最后用小鼠体内诱生法生产抗Hg2+腹水型单抗,其效价为1:51200。取杂交瘤细胞株2C3腹水单克隆抗体,通过对酸碱度等五个影响因子的研究建立了最佳ELISA检测体系。在该体系下,以汞离子标准液浓度的对数作为横坐标、以抑制率为纵坐标建立曲线,在1 ng/ml~1000 ng/ml范围内显著线性相关,检测方程为y=0.2423x+0.0979,R2=0.9835。为下一步环境中汞离子检测试剂盒的开发创造了条件,为今后开展相关ELISA检测方法的研究探索了道路。
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