论文部分内容阅读
目的:探讨上皮细胞-树突状细胞转分化(EDT)在失血性休克诱发全身炎症反应综合征(SIRS)中的作用及可能机制;并进一步研究维生素C是否通过抑制上皮细胞-树突状细胞转分化而抑制失血性休克导致的大鼠多器官损伤。方法:以缺氧培养干预体外培养的大鼠肠粘膜上皮IEC-6细胞,部分给予维生素C干预(20-100uM)。在缺氧培养2、6、24、48小时后提取蛋白质、mRNA及培养上清液。观察树突状细胞特异性细胞间粘附分子非整合素蛋白3(DC-SIGN)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、糖原合成酶激酶-3(GS K-3β)表达情况,及上清液白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)含量变化;从表型及分泌功能上探讨缺氧对小肠上皮细胞-树突状细胞转分化的影响,及VitC对这一过程所起的作用(n=3);以siRNA干扰IEC-6的E-cadherin表达,比较正常IEC-6和经过siR NA干扰的IEC-6在缺氧培养及Vit C干预后DC-SIGN表达情况的不同;以TDZD-8抑制GSK-3β活性,比较正常IEC-6和经过TDZD-8干预的IEC-6在缺氧培养及VitC干预后,DC-SIGN、E-cadherin表达情况的不同。共同探讨缺氧诱导上皮细胞-树突状细胞转分化的可能机制(n=3)。通过股动脉放血建立大鼠失血性休克模型,部分大鼠在复苏时给予维生素c干预(100mg/kg)。于复苏后2、6、24小时处死大鼠取标本,检测小肠、肾脏组织内dc-sign表达情况及定位,组织病理损伤,血浆和组织内促炎细胞因子含量(肿瘤坏死因子-a、白介素-6),及血清生化指标(尿素氮、肌酐、乳酸脱氢酶及乳酸)(n=6)。探讨失血性休克状态下的上皮细胞-树突状细胞转分化现象与组织炎症反应、脏器病理及功能损害的关系,及vitc干预所起的作用;结果:缺氧培养2小时后iec-6细胞表达dc-sign显著升高,同时e-cadherin表达下降,gsk-3β活性下降(p<0.05)。维生素c以剂量依赖的方式抑制缺氧诱导的iec-6细胞dc-sign表达升高,并缓解缺氧导致的e-cadherin表达下降及gsk-3β活性下降(p<0.05)。预先使用sirna干扰e-cadherin表达后,维生素c抑制缺氧诱导iec-6细胞dc-sign表达升高的作用被扭转(p<0.05)。预先使用特异性gsk-3β活性抑制剂tdzd-8抑制gsk-3β活性后,维生素c抑制缺氧诱导iec-6细胞e-cadherin表达下降的作用被扭转(p<0.05)。失血性休克诱导小肠上皮细胞、肾小管上皮细胞表达dc-sign,维生素c(100mg/kg)显著抑制dc-sign的表达(p<0.05)。维生素c干预显著抑制小肠、肾脏病理损伤,降低组织及血浆促炎细胞因子水平,改善血清生化指标(p<0.05)结论:缺氧培养及失血性休克可以诱导上皮细胞-树突状细胞转分化;维生素c对这一现象有抑制作用,并可通过抑制上皮细胞-树突状细胞转分化有效减轻失血性休克早期多器官炎症反应。