紫龙金片调控S180荷瘤小鼠免疫格局与抑瘤机制的研究

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目的:  本研究拟通过体内实验观察中药紫龙金片对S180肉瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用,测量计算免疫器官指数,并利用流式细胞术检测实验小鼠外周血中T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群、活化B细胞、成熟B细胞、活化T细胞、NK细胞、调节性T细胞以及细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF、IFN-γ的表达情况,初步探索中药紫龙金片的抑瘤作用机制与免疫功能调控的相关性,为中药抗肿瘤的临床应用提供了一定的基础。  方法:  1.细胞复苏与传代:将S180细胞冻存管水浴离心后得到S180细胞悬液,加入含有1640培养液、10%胎牛血清及青-链霉素培养基的培养皿中,放入5%CO2、恒温37℃培养箱中培养48小时,取对数期生长的S180肉瘤细胞,经胰蛋白酶消化离心去上清,用生理盐水将细胞浓度调整为2×107个/ml后,注射于小鼠腹腔内进行腹腔传代。  2.荷瘤小鼠模型的建立与分组:将S180肉瘤细胞悬液接种于昆明鼠左前肢腋部后缘部位的皮下构建S180荷瘤动物实验模型,随机分组(每组10只)。  3.紫龙金对荷瘤小鼠抑瘤作用的研究:第8天起按组别给予药物干预,测量小鼠体重,连续12天,停药24小时后进行眼眶取血,处死小鼠,剥离肿瘤、脾脏、胸腺,称取瘤重、脾重、胸腺重量,HE染色观察肿瘤组织结构及肿瘤细胞的凋亡坏死情况,并计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数。  4.紫龙金对荷瘤小鼠免疫格局调控的研究:利用流式细胞术检测实验小鼠外周血中T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞、活化B细胞、成熟B细胞、活化T细胞、NK细胞、NK-T细胞、调节性T细胞以及细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF、IFN-γ的表达,并分析其表达情况。  5.统计学分析:使用 SPSS19.0统计分析软件进行数据统计分析。  结果:  1.实验结束后,荷瘤组小鼠体重与正常组相比明显减少(P<0.05),化疗组小鼠的体重与其余各荷瘤组小鼠相比均明显减少(P<0.05)。  2.化疗和紫龙金联用组抑瘤率最高,为22.1%。紫龙金组抑瘤率为10.24%,化疗组抑瘤率为16.98%,二者间无统计学差异(P>0.05)。  3.荷瘤组脾脏指数与正常组相比明显升高(P<0.01),紫龙金组及两药联用组与荷瘤组比较脾脏指数明显减少(P<0.05),其中化疗和紫龙金联用组脾脏指数与正常组相比无统计学差异(P>0.05)。实验小鼠各组间胸腺指数无显著性差异(P>0.05)。  4.紫龙金片使S180荷瘤小鼠外周血中活化B淋巴细胞含量接近正常组,与正常组相比无统计学差异(P>0.05),并促进早期活化B淋巴细胞向活化B淋巴细胞的转化,使其转化率接近1比1。  5.与荷瘤组相比,紫龙金可提高小鼠外周血中CD3+、CD4+、CD25+、CD69+、CD19+、NK细胞、IL-6、IL-10的表达,并降低Treg细胞、TNF、IFN-γ、IL-17A的表达,化疗和紫龙金联用组可提高外周血中CD8+、NK-T细胞的表达,使其与其他治疗组相比含量达到最高。  结论:  1.紫龙金片对S180荷瘤小鼠肿瘤的生长具有抑制作用,其与化疗药联用时抑瘤作用效果最佳。  2.紫龙金片在一定范围内调节肿瘤机体免疫抑制功能,维持肿瘤机体内细胞免疫的平衡。  3.紫龙金片可提高活化B淋巴细胞的含量,促进早期活化B淋巴细胞向活化B淋巴细胞的转化,进而促进B淋巴细胞的发育。  4.紫龙金片可以降低前炎症细胞因子IL-17的表达减轻肿瘤机体的炎症反应。  5.紫龙金片能通过细胞免疫与体液免疫的共同作用维持肿瘤机体内免疫功能的稳态。
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