论文部分内容阅读
由于人类不合理的经营，常常导致森林病虫害周期性大发生，不仅给林业生产带来巨大的经济损失，而且还威胁着生态平衡。在森林害虫防治中以往多采用化学药剂，长期使用化学防治不仅导致害虫产生耐药性，而且用药量越来越大，形成恶性循环，对自然生态平衡造成严重的破坏，直接威胁着人、畜的安全，同时也增加了防治难度和资金的投入。 抗病虫基因工程的发展为防治病虫害开辟了一条新途径，对于植物的保护作用具有持续性，大大降低了病虫害的抗药性和对环境的污染，有效维护了生物多样性和生态平衡。 本文对东亚钳蝎昆虫毒素ANEP、AGAP在大肠杆菌BL-21中的最佳表达条件以及两种蝎神经性毒素实验室毒力测定进行研究，得出实验结果如下： 1.重组蛋白ANEP的理论分子量为15169.572 Da，Ala、，Cys、Gly和Thr分别占31.25％、13.02％、29.68％、26.04％; AGAP的理论分子量为15786.402 Da，其中Ala占30.3％，Cys占15.15％，Gly占28.78％，Thr占25.75％。 2.利用琼脂糖凝胶电泳对重组菌进行筛选，得到分布在标准DNA片断100bp到250bp之间的扩增基因条带，重组质粒成功转化到表达菌体中。 3.通过均匀设计实验，得出蝎神经性毒素ANEP最佳表达条件为:表达时间6h，诱导物浓度1mmol/L，菌液比例1:50，菌液OD值0.7;得出蝎神经性毒素AGAP的最佳表达条件为:表达时间6h，诱导物浓度0.5mmol/L，菌液比例1:100，菌液OD值0.5。 4.蝎神经性毒素ANEP200倍稀释液对于分月扇舟蛾，榆紫叶甲，落叶松毛虫的校正死亡率分别为84.48％，79.31％，83.05％;蝎神经性毒素AGAP200倍稀释液对于分月扇中蛾，榆紫叶甲，落叶松毛虫的校正死亡率分别为82.76％，68.97％，81.36％。 5.2种蝎神经性毒素重组蛋白对3种森林害虫均具有一定的杀虫效果，但ANEP杀虫效果均好于AGAP。AGAP对分月扇舟蛾的效果最佳，5种浓度的幼虫死亡率为51.72％-84.48％，对榆紫叶甲幼虫的毒力最差。