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本研究以草木灰、蚯蚓粪、精制棉下脚料、松针为原料，以鄂杂棉11为供试棉种，筛选出了适合棉花生长的育苗基质A05。从棉花苗期、花蕾期和结铃期筛选出3株具有较强抗棉花黄萎病的内生拮抗菌株MH-6、YUPP-1和MH-11。经16SrDNA测序鉴定，YUPP-1、MH-6、MH-11分别为解木聚糖类芽孢杆菌(P.xylanilyticus)，多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis1。对这3个菌株和组合后进行了定殖试验、室内盆栽、田间防病试验，结果表明，组合菌群具有良好的定殖和抗病效果。另外，将这3个菌株和组合后(菌含量比1∶1∶1)以108cfu/g浓度添加到基质中，确定这3个菌株在基质A05中的消长动态，然后以添加内生菌的基质进行育苗移栽，观察其在田间的抗病效果。具体研究结果如下：
1育苗基质配方筛选
基质的育苗质量反映出基质的配比优越性。试验以草木灰、蚯蚓粪、精制棉下脚料和松叶为原料配制基质，进行棉花育苗，以出芽率、叶片数、株高植株鲜重(叶，茎、根系鲜重)、干重(叶、茎、根系鲜重)和根系发达程度为农艺性状指标，筛选最优配比基质，得出以下结果：(1)出芽率：播种3d后，A01、A02、A04、A05基质和对照间出苗率较高，无显著差异，均在85%以上，而添加4份体积精制棉下脚料的A03基质的出芽率相对较低，为75.4%；(2)株高：A01的棉株最高，达20.32cm，与A02，A03，A04，A05基质间达0.05显著差异，A03基质棉花株高最低，为10.00cm，A02，A04，A05基质棉苗株高分别为14.83cm，14.21cm和13.37cm;(3)鲜重和干重：A05基质棉苗根系的鲜重和干重最高，分别达5.01g/株和0.65g/株，A03基质棉苗根系鲜重和干重最低，分别为2.00g/株和0.092g/株；这说明棉苗在A05基质上生长根系最发达。
2基质N、P、K、有机质及PH值测定
基质N、P、K、有机质及PH值是基质性能的重要方面。试验得出以草木灰和蚯蚓粪按体积比4∶3比例混合的A01基质N、P、K、有机质含量都是最高。A05基质N、P、K、有机质含量适中，PH值7.1，与对照相当。A02～A04基质和对照基质N、P、K、有机质含量相差不大，但是添加4份精制棉下脚料的A03有机质含量较高，达到312.29g/kg。A03基质显弱碱性，PH达到7.88。
3棉花内生拮抗菌的分离筛选与鉴定
在棉花苗期、花蕾期和结铃期用平板对峙法分别筛选出3株对棉花黄萎病具有较强拮抗作用的菌株，分别为MH-6、YUPP-1和MH-11，它们在平板上对棉花黄萎病抑菌圈分别达到10mm，15mm，17mm(打孔器直径为5mm)
经16sDNA测序得出，YUPP-1与解木糖类芽孢杆菌(P.xylanilyticus)同源性很高，达到99%，利用ClustaIX和TreeView软件将测序结果与同源性相近的菌株进行聚类分析，初步把菌株YUPP-1确定为解木聚糖类芽孢杆菌。菌株MH-6的16SrDNA序列与GenBank数据库中的序列进行同源性比较，发现它与多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)有极高的同源性，相似性高达99%，初步把菌株MH-6确定为多粘类芽孢杆菌。菌株MH-11的16SrDNA序列与GenBank数据库中的序列进行同源性比较，发现它与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis A23)有极高的同源性，相似性高达99%，初步把菌株MH-11确定为枯草芽孢杆菌
4生防菌在棉株内定殖评价
定殖试验表明，MH-6R、MH-11R、YUPP-1R均能顺利定殖于棉株体内，但其定殖数量会随着棉花发育的生育期不同而波动，并且生防菌的浓度对定殖群体数量具有正效应。多粘类芽孢杆菌MH-6R在棉株根际定殖数量随施用菌量的增加而逐渐提高，在处理后的第40d(苗期)，菌株定殖数量达到顶峰(使用浓度为1×108cfu/株时，定植浓度达1×105cfu/g)，随着棉株进一步发育，其定殖数量逐步下降．至结铃期其种群数量下降到每克棉微管组织1000个左右菌落。解木聚糖类芽孢杆菌YUPP-1R在苗期每克棉组织菌群定殖量不足1×104cfu，以后逐步增殖，在处理后的第60d(现蕾期)达到定殖高峰，随后逐步下降，到结铃期时，施用量为1×108cfu/株的体内菌群定殖量可维持在1×104cfu/g。枯草芽孢杆菌MH-11R在苗期和现蕾期定殖数量较少，并呈缓慢上升趋势，在处理后的第80d(开花结铃期)逐步达到定殖高峰，后期稍降，施用量为1×108cfu/株的棉株体内菌群定殖量可维持在1×104cgu/g。
5生防菌盆栽及小区防效试验
室内盆栽试验表明，当生防菌单独使用时，其防效顺序依次为：解木聚糖类芽孢杆菌YUPP-1＞多粘类芽孢杆菌MH-6＞枯草芽孢杆菌MH-11;3个菌株联合施用防治效果比各自单独施用好，在苗期该处理未有棉株罹病，仅在结铃期棉株发病率为3.3%，而对照发病率高达95%，病情指数高达41。
2010年的田间试验结果表明，3株菌单独施用时，在田间的实际防效顺序依次为；解木聚糖类芽孢杆菌YUPP-1＞多粘类芽孢杆菌MH-6＞枯草芽孢杆菌MH-11；3个菌株联合施用比各自单独施用防治效果好，在开花现蕾期，该处理发病率仅为5.2%，而对照发病率高达33.5%；在结铃期处理的发病率也仅9.4%，而此时对照的发病率高达47.5%。2011年的试验结果与2010年的结果趋势基本一致，只是在试验地，2011年的黄萎病整体发病情况要比2010年严重，这可能与气候条件密切相关。田间试验的结果与室内结果趋势基本一致，但整体防效与室内相比还是有一定差距。
6生防菌在A05的消长动态
3个菌株单独存在于A05基质中的存活消长动态试验表明：3个单独菌株在基质中的走势相似，菌株以1×106cfu/g添加到基质中，5d时间，3个菌株的含量下降1～1.5个数量级，10d又上升约1.5个数量级，之后走势平缓，在20d左右开始骤降。而对照一直保持低含量水平(60cfu/g以下)。
3个菌株同时存在于A05基质中的存活时间动态试验表明：每个菌在最初含量为1×106cfu／g的情况下，MH-6和MH-11两个菌株在5d含量下降1.5个数量级，之后持平，在20d左右又开始骤降，而YUPP-1在5d下降1.5个数量级之后，在10d左右又上升约1.5个数量级，之后含量缓慢下降，同样在20d左右含量还可达1.7×105cfu/g，之后开始骤降。对照一直保持较低水平。因此，20d内3个菌株在该基质中的比例约为10∶1∶1。
7抗病基质育苗移栽防病试验
两年不同地点的田间试验表明，A05R抗病基质育苗棉花移栽到到田间后，不同地点棉花发病率和病情指数的数值之间不同，但与对照相比，棉花发病率与病情指数均较低。在棉花开花期，A05R处理的棉花发病率在14%到21%之间，病情指数为6.4到14.0之间，而对照组棉花，开花期发病率均在45%～60%之间，病情指数为35.0到41.0之间。龄期的情况与开花期相似，只是对照和处理的病情均有轻微加重。
1育苗基质配方筛选
基质的育苗质量反映出基质的配比优越性。试验以草木灰、蚯蚓粪、精制棉下脚料和松叶为原料配制基质，进行棉花育苗，以出芽率、叶片数、株高植株鲜重(叶，茎、根系鲜重)、干重(叶、茎、根系鲜重)和根系发达程度为农艺性状指标，筛选最优配比基质，得出以下结果：(1)出芽率：播种3d后，A01、A02、A04、A05基质和对照间出苗率较高，无显著差异，均在85%以上，而添加4份体积精制棉下脚料的A03基质的出芽率相对较低，为75.4%；(2)株高：A01的棉株最高，达20.32cm，与A02，A03，A04，A05基质间达0.05显著差异，A03基质棉花株高最低，为10.00cm，A02，A04，A05基质棉苗株高分别为14.83cm，14.21cm和13.37cm;(3)鲜重和干重：A05基质棉苗根系的鲜重和干重最高，分别达5.01g/株和0.65g/株，A03基质棉苗根系鲜重和干重最低，分别为2.00g/株和0.092g/株；这说明棉苗在A05基质上生长根系最发达。
2基质N、P、K、有机质及PH值测定
基质N、P、K、有机质及PH值是基质性能的重要方面。试验得出以草木灰和蚯蚓粪按体积比4∶3比例混合的A01基质N、P、K、有机质含量都是最高。A05基质N、P、K、有机质含量适中，PH值7.1，与对照相当。A02～A04基质和对照基质N、P、K、有机质含量相差不大，但是添加4份精制棉下脚料的A03有机质含量较高，达到312.29g/kg。A03基质显弱碱性，PH达到7.88。
3棉花内生拮抗菌的分离筛选与鉴定
在棉花苗期、花蕾期和结铃期用平板对峙法分别筛选出3株对棉花黄萎病具有较强拮抗作用的菌株，分别为MH-6、YUPP-1和MH-11，它们在平板上对棉花黄萎病抑菌圈分别达到10mm，15mm，17mm(打孔器直径为5mm)
经16sDNA测序得出，YUPP-1与解木糖类芽孢杆菌(P.xylanilyticus)同源性很高，达到99%，利用ClustaIX和TreeView软件将测序结果与同源性相近的菌株进行聚类分析，初步把菌株YUPP-1确定为解木聚糖类芽孢杆菌。菌株MH-6的16SrDNA序列与GenBank数据库中的序列进行同源性比较，发现它与多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)有极高的同源性，相似性高达99%，初步把菌株MH-6确定为多粘类芽孢杆菌。菌株MH-11的16SrDNA序列与GenBank数据库中的序列进行同源性比较，发现它与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis A23)有极高的同源性，相似性高达99%，初步把菌株MH-11确定为枯草芽孢杆菌
4生防菌在棉株内定殖评价
定殖试验表明，MH-6R、MH-11R、YUPP-1R均能顺利定殖于棉株体内，但其定殖数量会随着棉花发育的生育期不同而波动，并且生防菌的浓度对定殖群体数量具有正效应。多粘类芽孢杆菌MH-6R在棉株根际定殖数量随施用菌量的增加而逐渐提高，在处理后的第40d(苗期)，菌株定殖数量达到顶峰(使用浓度为1×108cfu/株时，定植浓度达1×105cfu/g)，随着棉株进一步发育，其定殖数量逐步下降．至结铃期其种群数量下降到每克棉微管组织1000个左右菌落。解木聚糖类芽孢杆菌YUPP-1R在苗期每克棉组织菌群定殖量不足1×104cfu，以后逐步增殖，在处理后的第60d(现蕾期)达到定殖高峰，随后逐步下降，到结铃期时，施用量为1×108cfu/株的体内菌群定殖量可维持在1×104cfu/g。枯草芽孢杆菌MH-11R在苗期和现蕾期定殖数量较少，并呈缓慢上升趋势，在处理后的第80d(开花结铃期)逐步达到定殖高峰，后期稍降，施用量为1×108cfu/株的棉株体内菌群定殖量可维持在1×104cgu/g。
5生防菌盆栽及小区防效试验
室内盆栽试验表明，当生防菌单独使用时，其防效顺序依次为：解木聚糖类芽孢杆菌YUPP-1＞多粘类芽孢杆菌MH-6＞枯草芽孢杆菌MH-11;3个菌株联合施用防治效果比各自单独施用好，在苗期该处理未有棉株罹病，仅在结铃期棉株发病率为3.3%，而对照发病率高达95%，病情指数高达41。
2010年的田间试验结果表明，3株菌单独施用时，在田间的实际防效顺序依次为；解木聚糖类芽孢杆菌YUPP-1＞多粘类芽孢杆菌MH-6＞枯草芽孢杆菌MH-11；3个菌株联合施用比各自单独施用防治效果好，在开花现蕾期，该处理发病率仅为5.2%，而对照发病率高达33.5%；在结铃期处理的发病率也仅9.4%，而此时对照的发病率高达47.5%。2011年的试验结果与2010年的结果趋势基本一致，只是在试验地，2011年的黄萎病整体发病情况要比2010年严重，这可能与气候条件密切相关。田间试验的结果与室内结果趋势基本一致，但整体防效与室内相比还是有一定差距。
6生防菌在A05的消长动态
3个菌株单独存在于A05基质中的存活消长动态试验表明：3个单独菌株在基质中的走势相似，菌株以1×106cfu/g添加到基质中，5d时间，3个菌株的含量下降1～1.5个数量级，10d又上升约1.5个数量级，之后走势平缓，在20d左右开始骤降。而对照一直保持低含量水平(60cfu/g以下)。
3个菌株同时存在于A05基质中的存活时间动态试验表明：每个菌在最初含量为1×106cfu／g的情况下，MH-6和MH-11两个菌株在5d含量下降1.5个数量级，之后持平，在20d左右又开始骤降，而YUPP-1在5d下降1.5个数量级之后，在10d左右又上升约1.5个数量级，之后含量缓慢下降，同样在20d左右含量还可达1.7×105cfu/g，之后开始骤降。对照一直保持较低水平。因此，20d内3个菌株在该基质中的比例约为10∶1∶1。
7抗病基质育苗移栽防病试验
两年不同地点的田间试验表明，A05R抗病基质育苗棉花移栽到到田间后，不同地点棉花发病率和病情指数的数值之间不同，但与对照相比，棉花发病率与病情指数均较低。在棉花开花期，A05R处理的棉花发病率在14%到21%之间，病情指数为6.4到14.0之间，而对照组棉花，开花期发病率均在45%～60%之间，病情指数为35.0到41.0之间。龄期的情况与开花期相似，只是对照和处理的病情均有轻微加重。