【摘 要】
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目的:运用蛋白质组学双向电泳技术,研究自发乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠血清蛋白质组表达图谱的差异,结合质谱技术和生物信息学方法寻找和确定小鼠自发性乳腺癌发
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目的:运用蛋白质组学双向电泳技术,研究自发乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠血清蛋白质组表达图谱的差异,结合质谱技术和生物信息学方法寻找和确定小鼠自发性乳腺癌发生相关的特征性血清差异蛋白,为乳腺癌发生及早期诊断的蛋白质指纹图谱的建立奠定基础。 方法: 1 在自发乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠内眦取血,5000rps/min,离心10min后收集血清,将血清标本进行双向电泳,以固相pH梯度(IPG)等电聚焦(IEF)为第一向和垂直十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)为第二向,双向电泳结果经银染和ImageMaster 2D 5.0软件分析进行数字化匹配与对比,并通过统计学分析方法评价双向凝胶电泳结果,确认差异蛋白点。 2 经双向电泳确认为有差异的蛋白点,重新进行双向电泳后进行考马斯亮蓝染色,通过电喷雾-离子肼串联质谱(ESI-TOF)进行鉴定,获得的肽图和氨基酸序列经过SEQUEST数据库检索分析后,识别鉴定各个蛋白质。通过搜索IPI mouse蛋白质数据库,对鉴定出的各个蛋白质进行功能分析,阐述其在乳腺癌发生过程中作用的相关机制。 结果: 1 双向电泳预实验结果表明,自发乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠血清的双向电泳图谱清晰、重复性较好,银染后经ImageMaster 2D 5.0软件分析,不同胶匹配点相对含量的比值大于10者认为存在差异,共找到15个蛋白质点。其中6个点在自发乳腺癌小鼠和正常TA2小鼠表达缺失,在正常TA1小鼠表达;4个点在自发乳腺癌小鼠表达下调,在正常TA1小鼠表达上调,在正常TA2小鼠表达缺失;1个点在自发乳腺癌小鼠表达下调,在正常TA2表达上调,在正常TA1表达缺失;2个点在自发乳腺癌小鼠表达缺失,在正常TA2小鼠表达下
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